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Application de l’interférence CRISPR (CRISPRi) pour le silençage génique chez les espèces pathogènes de Leptospira
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Application of CRISPR Interference (CRISPRi) for Gene Silencing in Pathogenic Species of Leptospira
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Application de l’interférence CRISPR (CRISPRi) pour le silençage génique chez les espèces pathogènes de Leptospira

DOI:
10.3791/62631-v

•

14:49 min

•

August 14, 2021

•

, , ,
1Infectious Bacterial Diseases Research Unit, National Animal Disease Center, Agricultural Research Service,United States Department of Agriculture, 2Laboratório de Desenvolvimento de Vacinas,Instituto Butantan

Capitoli

  • 00:04Introduction
  • 02:56Protospacer Definition and Plasmid Construction
  • 04:24Leptospira Transformation by Conjugation
  • 09:35Colony Selection and Transconjugant Growth and Validation
  • 13:01Representative Results
  • 13:51Conclusions

Summary

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Ici, l’application de l’interférence CRISPR (CRISPRi) pour le silençage génétique spécifique chez les espèces de Leptospira est décrite. Les cellules de Leptospira sont transformées par conjugaison avec des plasmides exprimant dCas9 (Catalytiquement « mort » Cas9) et un ARN monoguide (SGRNA), responsable de l’appariement de base à la cible génomique souhaitée. Des méthodes pour valider le silençage génique sont présentées.

Tags

CRISPR InterferenceCRISPRiGene SilencingLeptospiraPathogenic SpeciesHornsby-Alt-Nally MediaLeptospirosisGenetic ToolsDCas9Single-guide RNAIn Vitro ResearchVaccine Development

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