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FLAG-ビオチンタンデム精製による架橋と免疫沈降によるタンパク質RNA相互作用のトランスクリプトーム全体プロファイリング
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Transcriptome-Wide Profiling of Protein-RNA Interactions by Cross-Linking and Immunoprecipitation Mediated by FLAG-Biotin Tandem Purification
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FLAG-ビオチンタンデム精製による架橋と免疫沈降によるタンパク質RNA相互作用のトランスクリプトーム全体プロファイリング

DOI:
10.3791/60730-v

•

08:46 min

•

May 18, 2020

•

, ,
1Tsinghua-Peking Center for Life Sciences, School of Medicine and School of Life Sciences,Tsinghua University, 2Department of Molecular Biology,University of Texas Southwestern Medical Center

Capitoli

  • 00:04Introduction
  • 00:41Crosslinking
  • 02:44Immunoprecipitation
  • 05:31Dephosphorylation and PNK Treatment
  • 06:53Results: WDR43 and LIN28 FbioCLIP-seq
  • 08:17Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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ここでは、哺乳類細胞におけるRNA結合タンパク質(RRB)のRNA標的を決定するために、フラグビオチンタンデム精製を用いて 、FbioCLIP-seqと呼ばれる改変CLIP-seqプロトコルを提示する。

Tags

Protein-RNA InteractionsCLIP-seqFLAG-BiotinTranscriptome-wide ProfilingRBPsMammalian CellsDirect Protein-bound RNAsIsotope-freeSDS-PAGEMembrane TransferMouse Embryonic Stem CellsUV Cross-linkingCell LysisDNase I TreatmentFLAG BeadsFLAG Peptide Elution

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