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Preparación de compartimientos los cloroplasto de Arabidopsis para el análisis de la localización de la proteína por Immunoblotting o proteómica
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Capitoli
- 00:04Titolo
- 01:01Harvesting of Arabidopsis Leaves
- 02:26Purification of Crude Chloroplasts Using Differential Centrifugation
- 03:30Purification of Intact Chloroplasts on Continuous Percoll Gradient
- 04:51Lysis of Intact Chloroplasts Using a Hypotonic Buffer and Purification of Chloroplast Sub-Compartments on Discontinuous Sucrose Gradients
- 06:05Washing and Concentration of Thylakoid and Envelope Membrane Systems
- 07:09Results: Analysis of Protein Localization by Immunoblotting or Proteomics
- 08:44Conclusion
Aquí, describimos un método para purificar cloroplastos intactos de hojas de Arabidopsis y de sus tres principales compartimentos sub (envoltura, estroma y tilacoides), usando una combinación de diferencial centrifugados, gradientes de Percoll continuados, y gradientes de sacarosa discontinuas. El método es útil para subplastidial y localización subcelular de las proteínas por immunoblotting y proteómica.
