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Preparazione del cloroplasto Sub-compartimenti da Arabidopsis per l'analisi di localizzazione della proteina di Immunoblotting o proteomica
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Capitoli
- 00:04Titolo
- 01:01Harvesting of Arabidopsis Leaves
- 02:26Purification of Crude Chloroplasts Using Differential Centrifugation
- 03:30Purification of Intact Chloroplasts on Continuous Percoll Gradient
- 04:51Lysis of Intact Chloroplasts Using a Hypotonic Buffer and Purification of Chloroplast Sub-Compartments on Discontinuous Sucrose Gradients
- 06:05Washing and Concentration of Thylakoid and Envelope Membrane Systems
- 07:09Results: Analysis of Protein Localization by Immunoblotting or Proteomics
- 08:44Conclusion
Qui, descriviamo un metodo per purificare i cloroplasti intatti da foglie di Arabidopsis e loro tre sub-scomparti principali (busta, lo stroma e tilacoidi), utilizzando una combinazione di centrifugazione differenziale, gradienti di Percoll continui, e pendenze del saccarosio discontinuo. Il metodo è utile per subplastidial e localizzazione subcellulare delle proteine mediante immunoblotting e proteomica.
