RNAi介导的双基因敲除和味觉感知测量蜜蜂（<em>蜜蜂</em>）

RNA干扰（RNAi）是基于RNA的转录后基因沉默，这发生在各种各样的真核生物。 RNAi过程被触发时由内源性或外源性的双链RNA（dsRNA）的前体。双链RNA激活核糖核酸酶蛋白Dicer酶结合并切割双链RNA小片段（20-25个基点）。然后，小片段的双链RNA导Argonaute蛋白的mRNA互补的识别和切割RNA诱导的沉默复合物^{（RISC），}催化剂组分。在哺乳动物中，超过30 nt的双链RNA，激活抗病毒反应（IFN）干扰素反应，从而导致非特异性降解RNA转录^2。然而，长dsRNA已被证明是有效的，具体的昆虫，因为有一个缺乏这IFN ^3。

长双链RNA下调靶基因已被用于在不同的昆虫种类。蜜蜂是一个π介子能效比昆虫生物，其中许多重要功能基因的开发和行为已被揭露出来使用双链^4,5。几个dsRNA的交付方法，已进行了蜜蜂的dsRNA喂养蜜蜂幼虫⁶有效下调靶基因的表达，而在蜜蜂胚胎和成年蜜蜂^7,8双链RNA注射液是一种有效的基因敲除的方法。

展出的昆虫双链RNA的基因敲除的影响是短暂和局部的。有研究表明，腹腔注射双链RNA和胸双链RNA注射，有效地抑制靶基因的表达，腹部脂肪体细胞的昆虫^9,10。双链RNA注射到腹腔和胸腔和脂肪体细胞能够采取双链RNA细胞血淋巴沐浴^10。然而，基因在其他器官，如卵巢和大脑，不能有针对性要么腹腔或胸腔注射。以目标基因在蜜蜂的大脑，大脑的dsRNA注入也被执行，有效地影响局部脑区¹¹靶基因的表达。在这里，我们只记录腹双链RNA注射，这是较为常用的成年蜜蜂。

RNA干扰已被主要用于针对一个单一的基因，一直是一个强大的工具来揭示基因功能。然而，任何基因从别人不是孤立的，它是在复杂的调控网络。了解生物过程的一个关键是解剖与对方，这需要同时操作多个基因，而不是一个单一的基因敲除基因如何相互作用。在哺乳动物细胞系同时抑制两种或三种基因，科学家们已经成功地通过输送系统¹²多的microRNA（miRNA）的发夹设计^13。但在昆虫，多基因击倒仍未经验证。这里，我们PRESEN了吨不同注射的策略可以实现双基因敲除。我们的目标是两种基因：卵黄蛋白原（VG），它编码一个卵黄蛋白的前体，和ultraspiracle（ 美国药典 ），保幼激素（JH），编码一个假定的受体可能作为一种转录因子介导的反应在蜜蜂JH ^14。 Vg和JH相互调节在反馈回路^15，并参与了蜜蜂行为调节^9。使用双基因敲除，我们扰乱Vg和JH途径，并发现它们是如何共同影响蜜蜂的行为和生理VG，USP和JH如何互动^9。

味觉感知是一种行为预测蜜蜂社会行为^16。行为的发展，巢蜜蜂高味觉感知行为成熟的快，通常在生命早期的牧草，喜欢收集花粉^16,17。虽然监管米相关echanisms味觉感知目前仍不清楚，有研究表明，味觉的感知与内部能量代谢^9，荷尔蒙分泌^18,19和生物遗传胺通路^20。 Vg和JH重要的荷尔蒙调节调节味觉感知^7,21。在实验室中，味觉感知蜜蜂的变化进行评估测试长鼻延伸反应（PER）的不同的蔗糖溶液。每个蜂测试升序一系列浓度为0.1，0.3，1，3，10，30％的蔗糖的液滴的水通过触摸她的触角。注意，如果蜜蜂完全延伸她的长鼻液滴的水或蔗糖时，每个天线被触摸到的正响应。理想的反应溶液的数量的基础上，每一个人的味觉感知水平，可确定^16。但是，应用程序的PER并不限于测量克感知ustatory。市盈率也是一种有效的方法来测试，如饱食与饥饿的代谢状态的蜜蜂。蜜蜂蔗糖有较大的反应一般是饿（王Amdam的，未发表的数据）。此外，市盈率的模式也可以被用来在联想学习和记忆的蜜蜂。在这种情况下，蜜蜂将接受培训，蔗糖水与气味是否存在关联。当蜜蜂学习的联想，只有存在的气味能唤起积极长鼻响应，没有奖励他们与蔗糖^22,23。在这段视频中，我们将展示如何执行市盈率评估味觉感知，已与VG和USP双击倒在先前的研究^9。