嗅觉受体神经元(ORNs)气味信号转换成一个受体的电流,从而触发动作电位,被输送到第二个神经元在嗅球中。这里,我们描述的吸入移液管的技术,同时记录从小鼠ORNs电流和动作电位的加臭剂诱导的受体。
动物采样的臭味通过化学感受系统位于鼻腔周围环境。化学感受信号的复杂行为的影响,如食物的选择,捕食,同种和配偶识别和其他社会有关的线索。位于嗅觉受体神经元(ORNs)中嵌入鼻腔的嗅觉上皮细胞背侧部分。这些双极神经元的轴突发送到嗅球(见图1,Reisert钊1,最初发表于普通生理学杂志“)和扩展的单枝晶的纤毛辐射到的粘液覆盖的嗅觉上皮细胞的边界上皮细胞。的纤毛包含的信号转导机制,最终导致兴奋性通过睫状转导通道,环核苷酸门控通道(CNG)的Ca 2 +活化的Cl -的信道( 图1)流入的电流。随之而来的depola三丙触发在电池主体2-4的动作电位的产生。
在这个视频中,我们描述了使用的“吸吸液管技术”,记录的气味引起的反应ORNs。该方法最初发展到记录从杆感光体5和jove.com修改,以记录从鼠标锥感光体6,可以发现在该方法的一个变种。后来被改编吸入吸液管技术也记录ORNs 7,8。简要地说,在解离的嗅觉上皮细胞和细胞分离后,整个细胞的ORN体被吸入到的记录吸管的前端。枝晶和纤毛仍然暴露于沐浴液,从而解决方案的变化,例如,使气味或药物受体阻滞剂的应用。在此配置中,还没有进入到细胞内环境获得(的没有全细胞电压钳)和细胞内的电压保持自由变化。这一切都OWS受体电流缓慢,起源于发射的细胞体9纤毛和快动作电位的同时记录。动力学这两个信号之间的差异在允许它们被分开使用不同的过滤器设置。这种技术可以用在任何野生型或基因敲除小鼠,或选择性地从记录ORNs也表达GFP标记的特定子集ORNs,例如表示一个给定的加臭剂的受体或离子通道。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由美国国立卫生研究院DC009613,人类前沿科学计划和莫雷护理奖学金(JR)的支持。