Odorant induites réponses enregistrées à partir de neurones récepteurs olfactifs en utilisant la technique de la pipette d'aspiration

Animaux échantillonner l'environnement odorant autour d'eux à travers les systèmes chimiorécepteurs situés dans la cavité nasale. Signaux chimiosensoriels affectent les comportements complexes tels que le choix des aliments, prédateur, conspécifiques et la reconnaissance compagnon et d'autres indices socialement pertinents. Neurones récepteurs olfactifs (ORNs) sont situés dans la partie dorsale de la cavité nasale noyée dans l'épithélium olfactif. Ces neurones bipolaires envoyer un axone vers le bulbe olfactif (voir Fig. 1, Reisert & Zhao ^1, initialement publié dans le Journal of General Physiology) et d'étendre une dendrite unique à la frontière épithéliales de rayonner cils où dans le mucus qui recouvre la olfactif épithélium. Les cils contenir le mécanisme de transduction du signal qui mène à excitateurs afflux de courant à travers les canaux de transduction ciliaire, un nucléotide cyclique-dépendant (CNG) et un canal de Ca ^{2 +-Cl} actif ^– canal (Fig. 1). Le depola qui a suivirisation déclenche la génération du potentiel d'action sur le corps ^{2-4 Cellules.}

Dans cette vidéo, nous décrivons l'utilisation de la "technique d'aspiration pipette" pour enregistrer odorant réponses induites à partir ORNs. Cette méthode a été développée à l'origine pour enregistrer à partir photorécepteurs à bâtonnets ⁵ et une variante de cette méthode peut être trouvé à jove.com modifié pour enregistrer à partir de cônes photorécepteurs de souris ^6. La technique pipette d'aspiration a été adapté plus tard pour également enregistrer à partir ORNs ^7,8. Brièvement, après dissociation de l'épithélium olfactif et d'isolement des cellules, le corps de la cellule entière d'une ORN est aspiré dans la pointe de la pipette d'enregistrement. La dendrite et les cils restent exposées à la solution de bain et donc accessible à des changements de solution pour permettre par exemple odorant ou une application de blocage pharmacologique. Dans cette configuration, pas d'accès à l'environnement intracellulaire est acquise (pas de blocage de tension de cellule entière) et la tension intracellulaire reste libre de varier. Tout celaux l'enregistrement simultané du courant qui provient du récepteur lent à des cils et des potentiels d'action rapide tiré par le corps ⁹ cellules. La différence de cinétique entre ces deux signaux permet de les séparer en utilisant différents paramètres de filtre. Cette technique peut être utilisée sur n'importe quel type sauvage ou de la souris knock-out ou d'enregistrer de manière sélective à partir ORNs qui expriment la GFP également d'étiqueter des sous-ensembles spécifiques de ORNs, par exemple, l'expression d'un récepteur olfactif donnée ou canal ionique.