Искусственный клеток являются недостаточными модель повторять иннервируемых мышц<em> В естественных условиях</em>. Функциональный блок двигателя может быть воспроизведена<em> В пробирке</em> По иннервации дифференцированных человеческих первичных клеток эмбриона крысы использование эксплантов спинного мозга. Эта статья описывает, как со-культур спинного мозга и эксплантов мышечных клетках установлены.
Человека первичных клеток культивировали в монослое aneurally редко контракт спонтанно, потому что, при отсутствии нервного компонента клеточной дифференцировки ограничены и двигательных нейронов возбуждение отсутствует 1. Эти ограничения препятствуют в пробирке исследования многих нервно-мышечных заболеваний в культуре клеток. Важно отметить, что экспериментальные ограничения monolayered, культивируемых клетках мышц может быть преодолен функциональный иннервации мышечных волокон с спинного мозга в эксплантов со-культур.
Здесь мы покажем, различные шаги, необходимые для достижения эффективных, надлежащих иннервации человека первичных клеток, приводит к полной дифференциации и сокращения волокна в соответствии с методом, разработанным Askanas 2. Для этого, мышечные клетки культивировали совместно со спинальной эксплантов шнур эмбрионов крыс на ED 13.5, со спинной ганглий корень все еще прикреплены к спинной кусочки мозга. Через несколько дней, мышцы FiБерс начать сокращаться и в конечном итоге стать поперечно-полосатой через иннервации функциональной невриты, выступающую из спинного мозга, что эксплантаты подключения к мышечным клеткам. Эта структура может сохраняться в течение многих месяцев, просто регулярный обмен питательной среде.
Применение этого бесценного инструмента являются многочисленными, как он представляет собой функциональную модель междисциплинарного анализа человеческого развития мышц и иннервации. На самом деле, полное заново нервно-мышечного соединения установка происходит в культуре блюдо, позволяющий легко определить многие параметры на каждом шагу, в фундаментальные и физиологические контексте.
Просто приведу несколько примеров, геномных и / или протеомных исследований могут быть выполнены непосредственно на со-культур. Кроме того, в пред-и пост-синаптические эффекты могут быть специально и отдельно оценивается в нервно-мышечном соединении, так как компоненты из разных видов,крысы и человека, соответственно. Нервно-мышечного со-культуры могут быть выполнены с человеческими клетками, выделенных от больных страдают от мышечной или нервно-мышечными заболеваниями 3, и таким образом может быть использован в качестве инструмента отбора кандидатов для лекарств. Наконец, ни специального оборудования, но регулярно BSL2 объект, необходимых для воспроизведения функциональных двигательных единиц в культуре блюдо. Этот метод так ценен как для мышц, а также нервно-мышечных общин исследования физиологических и механических исследований нервно-мышечных функций, в нормальные и заболевание контексте.
Физиологические в пробирке инструментом для изучения функции мышечных клеток в норме и патологии контексте наибольший интерес для myologists, потому что культуру мышечных клеток, как правило, не повторять о важности нескольких ячеек и типа соединения. Кроме очищенной моторных нейрон?…
The authors have nothing to disclose.
Наша работа при поддержке Швейцарского национального научного фонда (ОЯТ), швейцарская инициатива в системной биологии (SystemsX.ch), мышечная дистрофия ассоциации США (MDA), Ассоциация Française контр-ле-Миопатии (АСМ), Соединенные митохондриальной болезни фонда (UMDF), Геберт-ОРФ Фонд редких болезней программы (ГРФ), Швейцарского общества исследований мышечных заболеваний (SSEM / FSRMM), Swiss Life "Jubiläumsstiftung für Volksgesundheit унд медицинских исследований", Roche Фонд исследований и университета Базель.
Name of reagent | Company | Catalog Number |
HBSS | Gibco/Invitrogen | 14170 |
MEM | Gibco/Invitrogen | 31095 |
Medium 199 | Gibco/Invitrogen | 31153 |
Fetal Bovine Serum | Fetal Clone Perbio | SH30066.03 |
Insuline | Sigma | I9278 |
Human EGF | Sigma | E9644 |
Human FGF | Sigma | F0291 |
Penicillin/streptomycin solution | Gibco | 15140 |