培養筋細胞は、神経支配のある筋を再現するために不十分なモデルである<emin vivoでの></em>。機能的なモータユニットを再現することができます<em> in vitroで</em>ラット胚脊髄の外植片を用いて分化したヒト初代筋細胞の神経支配によって。この資料では、脊髄の外植片と筋細胞の共培養が確立されている方法について説明します。
神経成分の存在下で、細胞の分化が制限されており、運動ニューロンの刺激は、1が欠落している自発的に、ためにヒト初代筋細胞は単層でaneurallyまれに契約を培養した。これらの制限は、培養筋細胞の多くの神経疾患のin vitroでの研究を妨げる。重要なのは、単層、培養筋細胞の実験的な制約は、共培養における脊髄外植片と筋線維の機能的神経支配によって克服することができます。
ここでは、Askanas 2によって開発された方法に従って、差別化と繊維の収縮を完了するには、リード、ヒト初代筋細胞の効率的、適切な神経支配を達成するために必要な様々なステップを示しています。これを行うには、筋細胞はまだ脊髄スライスに接続された後根神経節で、ED 13.5でラット胎児の脊髄外植片と共培養されています。数日後、筋肉のfibers契約を開始し、最終的には筋細胞への接続という脊髄外植片から突出した機能的な神経によって支配によって横紋になる。この構造は、単に培養液の定期的な交換によって、多くのヶ月間維持することができます。
それは人間の筋肉の発達と神経支配の学際的な分析のための機能モデルを表して、この非常に貴重なツールのアプリケーションは、たくさんあります。実際には、完全なde novoの神経筋接合部のインストールは、基本的および生理学的文脈では、各ステップで多くのパラメータを簡単に測定できるように、培養皿で発生します。
ほんの一例、ゲノムおよび/またはプロテオミクス研究を引用する共培養上で直接実行することができます。両方のコンポーネントが別の種から来るので、さらに、プリ·ポストシナプスの効果が具体的かつ個別に、神経筋接合部で評価することができ、ラットとヒトであった。神経筋の共培養はまた、筋肉や神経筋疾患3から患っている患者から単離されたヒト筋細胞で行うことができるため、候補薬剤のスクリーニングツールとして使用することができます。最後に、特別な機器が、通常のBSL2施設は、培養皿の中で機能的なモータユニットを再現する必要はありません。このメソッドは、このように、正常および疾患のコンテキストで、筋肉だけでなく、神経筋機能の生理学的および機構の研究のための神経の研究コミュニティの両方の価値があります。
筋細胞の培養は、通常、複数の細胞および細胞型接続の重要性を再現していないため、正常および病理学的文脈において筋細胞の機能を研究する生理学的なin vitroのツールは 、myologistsの最重要である。筋細胞に運動ニューロンの精製加えてシュワン細胞の存在は、5効率的に神経支配のために必要とされ、それに関連するプロトコルがここで説明する(3D +特殊なディス?…
The authors have nothing to disclose.
私たちの仕事は、スイス国立科学財団(SNF)、システム生物学(SystemsX.ch)、筋ジストロフィー協会アメリカ(MDA)、協会·フランセーズcontreレミオパシー(AFM)、米国ミトコンドリア病財団、スイスのイニシアティブによってサポートされています(UMDF)、ゲーベルト-RUF財団まれな疾患プログラム(GRF)、筋疾患(SSEM / FSRMM)、スイスライフ "JubiläumsstiftungエリーゼVolksgesundheitウントmedizinische Forschung"、ロシュ研究財団と大学の研究のためのスイス社会バーゼルの。
Name of reagent | Company | Catalog Number |
HBSS | Gibco/Invitrogen | 14170 |
MEM | Gibco/Invitrogen | 31095 |
Medium 199 | Gibco/Invitrogen | 31153 |
Fetal Bovine Serum | Fetal Clone Perbio | SH30066.03 |
Insuline | Sigma | I9278 |
Human EGF | Sigma | E9644 |
Human FGF | Sigma | F0291 |
Penicillin/streptomycin solution | Gibco | 15140 |