우리는 대부분의 빛을 반사 현미경에 맞게 설계된 저가의 극저온 단계의 제조를 보여줍니다. 이 연구소 – 건설 극저온 단계 cryo – 빛과 cryo – 전자 현미경 사이에 효율적이고 신뢰할 수있는 상호 이미지 수 있습니다.
cryo – 가벼운 현미경 (cryo – LM)과 cryo – 전자 현미경의 결합 (cryo – EM)은 세포 역학과 ultrastructure을 이해하는 장점 번호를 포즈. 첫째, 전지는 두 기술에 대한 거의 원시 환경에서 몇 군데 있습니다. vitrification 과정으로 인해, 둘째로, 샘플은 빠른 물리적 고정보다는 느린 화학적 고정에 의해 보존되어 있습니다. 셋째, 이미지는 cryo – LM 및 cryo – EM 모두 같은 예제는 하나의 세포가 아닌 "대표 샘플"의 비교에서 데이터의 상관 관계를 제공합니다. 이러한 혜택을 잘 이전 연구에서 알려져 있지만, 상호 cryo – LM 및 cryo – EM 유해 널리 사용은 적합한 극저온 가벼운 현미경 단계를 사거나 건물의 비용과 복잡으로 인해 제한. 여기서 우리는 조립을 설명하고, 지역의 하드웨어와 식료품점에서 발견된 부품 달러 미만 40 어떤 실험실에서 조작된 수있는 저렴한 극저온 단계 중 하나를 사용하십시오. 이 cryo – LM 단계는 긴 작동 거리 공기 목표 장착되어 아르 반사광 현미경과 함께 사용하도록 설계되었습니다. 상호 cryo – LM 및 cryo – EM 연구, 우리는 표본의 지원으로 탄소 코팅 표준 3 – mm cryo – EM의 격자의 사용을 개작. 그리드에 샘플을 adsorbing 후 샘플을 vitrifying 및 전송 / 격자를 처리 이전에 설립된 프로토콜은 다중 기술 이미징을 허용하기 위해 다음 있습니다. 따라서,이 설치 프로그램은 반사광 현미경있는 모든 무기를 냉동 수산화 샘플의 직접적인 상호 이미지에 액세스할 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
저자는 본 연구에서 사용되는 효모 변형에 대한 액세스를 제공하는 브랜든 J. Zipp와 켄 B. 카플란 감사하고 싶습니다. 저자는 또한 찍고와 지원을 훌리오 레닌 도밍게즈 – 라미레즈 감사합니다. 말씀 그랜트 번호 5RC1GM91755에서 NIH 자금 지원을 인정한다.
Table of specific reagents and equipment:
Name | Company | Catalog # | Comments | Cost |
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1 – 22.86 cm (9″) pie pan with sloped edge | Good Cook | Local grocery store | $4.39 | |
1 – 22.86 cm (9″) cake pan | Good Cook | Local grocery store | $4.93 | |
4 pairs of chopsticks | Local grocery store | $.50 | ||
1 – Great Stuff spray foam | Great Stuff | Local hardware store | $5.98 | |
1 – 4cm x8cm x1cm block of aluminum | Local hardware store or metal scrap yard | $10.00 | ||
5 – #10 1.91 cm (3/4″) flat head slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
3 – #4 0.95 cm (3/8″) round slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
15 – #10 washers | Local hardware store | $0.98 | ||
2 – transparent plastic clipboards | Local office store | $6.84 | ||
1 – Cryo-EM grid box holder | Ted Pella | 160-41 | N/A | |
1 – Cryo-EM grid box handling rod | Ted Pella | 160-46 | N/A | |
1 – R2/1 holey carbon film, 400-mesh copper cryo-EM support grid | SPI Supplies | 4340C-XA | N/A |
Experimental materials