我们展示了一种低成本的低温阶段,设计,以适应最反射光显微镜的制造。这个实验室建成的低温阶段,实现高效,可靠的冷冻光线和低温电子显微镜之间的相关性成像。
耦合低温光镜(冷冻LM)和低温电子显微镜(冷冻电镜)对细胞动力学的理解和超微结构的许多优点。首先,细胞可成像两种技术在不久的原生环境。其次,由于玻璃化过程中,样品保存快速物理固定,而不是缓慢的化学固定。第三,成像同一样品冷冻LM和冷冻电镜提供相关的数据从一个单细胞,而不是一个“有代表性的样品”的比较。虽然这些好处是从以前的研究,相关冷冻- LM和冷冻电镜仍然广泛使用有限的,由于购买或建立一个合适的低温光镜阶段的费用和复杂性。在这里,我们展示了大会,并用不到40美元,在当地的硬件和杂货店发现部分可以在任何实验室制造的一种廉价的低温阶段。这冷冻LM阶段的目的是反映装有长工作距离的空中目标的光学显微镜的使用。对于相关的冷冻LM和冷冻电镜研究,我们适应标本支持使用碳涂层标准的3毫米的冷冻电镜电网。网格吸附样品后,vitrifying样品和转让/处理电网先前建立的协议之后,允许多技术成像。因此,此设置允许任何一个反射光显微镜实验室有直接相关的冷冻水合样品成像。
The authors have nothing to disclose.
作者衷心感谢布兰登J. Zipp和肯B.卡普兰在这项研究中所使用的酵母菌株提供访问。作者还感谢胡里奥列宁多明格斯,拉米雷斯与摄录援助。高考承认授予数量5RC1GM91755从美国国立卫生研究院的资金支持。
Table of specific reagents and equipment:
Name | Company | Catalog # | Comments | Cost |
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1 – 22.86 cm (9″) pie pan with sloped edge | Good Cook | Local grocery store | $4.39 | |
1 – 22.86 cm (9″) cake pan | Good Cook | Local grocery store | $4.93 | |
4 pairs of chopsticks | Local grocery store | $.50 | ||
1 – Great Stuff spray foam | Great Stuff | Local hardware store | $5.98 | |
1 – 4cm x8cm x1cm block of aluminum | Local hardware store or metal scrap yard | $10.00 | ||
5 – #10 1.91 cm (3/4″) flat head slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
3 – #4 0.95 cm (3/8″) round slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
15 – #10 washers | Local hardware store | $0.98 | ||
2 – transparent plastic clipboards | Local office store | $6.84 | ||
1 – Cryo-EM grid box holder | Ted Pella | 160-41 | N/A | |
1 – Cryo-EM grid box handling rod | Ted Pella | 160-46 | N/A | |
1 – R2/1 holey carbon film, 400-mesh copper cryo-EM support grid | SPI Supplies | 4340C-XA | N/A |
Experimental materials