解剖鼠标眼的视网膜色素上皮的全山
Summary
解剖一只老鼠眼的一个正式的示范，导致在整个视网膜色素上皮的坐骑。
Abstract
视网膜色素上皮（RPE）是哺乳动物的眼睛后面，刚下的视网膜神经元，其中包含的光感受器（杆和视锥细胞）。色素上皮是单层联营密切的正上方的神经视网膜色素立方细胞和。这种关联使视网膜色素上皮对视网膜疾病的研究极大兴趣。的RPE也是一个同源DNA修复， 联合国的 P检测体内检测站点。鼠标的眼睛是特别困难的解剖，由于其体积小（直径约3.5毫米）和球形形状。本文演示了详细的剥离导致眼睛在整个视网膜色素上皮安装程序。在此过程中，我们将展示如何工作对眼睛的球形结构，而不是的。简言之，结缔组织，肌肉，和视神经从眼球后部。然后，角膜和晶状体将被删除。下一步，战略裁员，在重大其余组织的扁平化的结果。最后，视网膜神经轻轻地升空，揭示了一个完整的视网膜色素上皮，这仍然是连接到底层脉络膜和巩膜。这整个挂载可用于执行联合国的 P检测或免疫组化或免疫视网膜色素上皮组织的评估。
Protocol
Discussion
视网膜色素上皮是联合国的 P检测的站点，在体内的同源性定向修复检测。 联合国的 p检测已用于研究不同的DNA损伤的影响 ，1,2和频率上的同源性定向修复DNA损伤信号和修复基因3,4,5。此实验是非常敏感的检测单细胞活动的RPE 1。它也可以检测到 6在开发过程中的同源性定向修复事件的时间差异。鼠眼径向向外发展视神经7，<…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由全国环境卫生科学研究所的支持K22ES012264 AJRB]和美国癌症协会InstitutionalResearch格兰特[ACS – IRG – 00 – 173 – 04]试点projectaward [AJRB]。我们也感谢批判性阅读的稿件和评论，尤其是视频和亚当布朗主教实验室的成员，什么不该做的例子。我们感谢让我们解剖视频拍摄他解剖的范围/摄像机设置使用Greehey儿童癌症研究所的博士唐纳德麦克尤恩。我们感谢达龙布朗科尔特仪器锐化和修复我们的显微切割工具。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| straight forceps | Roboz | RS-4903 | tip: .08 x .04 mm material: INOX | |
| 45° forceps | Roboz | RS-5005 | tip: .05 x.01 mm material: INOX | |
| 15° “up” forceps | Roboz | RS-5045A | tip: .1 x.06 mm material: INOX | |
| spring scissors | Roboz | RS-5604 | comb. tip width 0.3mm cutting edge length 3mm material: stainless steel | |
| binocular dissecting microscope | Ziess | Discovery V.8 | use reflected light source | |
| phalloidin | Invitrogen | A22283 | Alexa Fluor 546 |
Riferimenti
- Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice. Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).
- Reliene, R. H. l. a. v. a. c. o. v. e., Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H. Diesel exhaust particles cause increased levels of DNA deletions after transplacental exposure in mice. Mutat. Res. 570, 245-2452 (2005).
- Bishop, A. J., Barlow, C., Wynshaw-Boris, A. J., Scheistl, R. H. Atm deficiency causes increased frequency of intrachromosomal homologous recombination in mice. Cancer Res. 60, 395-399 (2000).
- Brown, A. D., Claybon, A. B., Bishop, A. J. Mouse WRN helicase domain is not required for spontaneous homologous recombination-mediated DNA deletion. J. Nucleic Acids. , (2010).
- Claybon, A., Karia, B., Bruce, C., Bishop, A. J. PARP1 suppresses homologous recombination events in mice in vivo. Nucleic Acids Res. , (2010).
- Bishop, A. J. p53-, and Gadd45a-deficient mice show an increased frequency ofhomologous recombination at different stages during development. Cancer Res. 63, 5335-5343 (2003).
- Bodenstein, L., Sidman, R. L. Growth and development of the mouse retinalpigment epithelium. Part I. Cell and tissue morphometrics and topography of mitoticactivity. Dev Biol. 121, 192-204 (1987).
- Burke, J. M. Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt?. Prog Retin. Eye Res. 27, 579-595 (2008).
