3D培養基質膜アッセイ:細胞浸潤を研究するための3次元基質膜タンパク質マトリックス上での癌細胞の培養
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:クヴェトコビッチ、D.、他.3次元(3D)モデルを用いた乳がん細胞浸潤の定量化J. ヴィス・エクス (2014).
このビデオは、周囲の環境への細胞浸潤の評価における3D培養の可能性を例示し、3D基膜タンパク質マトリックスで乳癌細胞を成長させる詳細な方法論を提供する。
Protocol
1. 基部膜マトリックスにおける乳がん細胞の三次元培養(埋め込み技術) マトリゲル基質膜マトリックスの取り扱い:4°Cで一晩氷上で解凍する。 基質膜マトリックスは低温で液体であるが、室温で固化する。氷の上に基膜マトリックスを保つ(図1A-B)。 P-200ピペットマンの先端をスパイラルパターンで広げ、50μlの基底膜マトリックスで共焦点No.1ガラス底?…
Representative Results
図 1.MDA-MB-231乳がん細胞の基部膜マトリックスにおける三次元培養(埋め込み技術)。 A-B)実験用セットアップの模式図(ヒュームフードで行う)。C) 50 μlの基底膜マトリックスでコーティングされたガラス底皿のウェル。D)ディッシュ(es)細胞培養インキュベーター(5%CO2で37°C)に入れ、マトリックスが少なくとも30分間固化?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citazione di questo articolo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).