3D 배양 지하 막 분석: 세포 침공을 연구하기 위해 3D 지하 막 단백질 매트릭스에 암세포를 배양
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: Cvetković, D., 외. 3차원(3D) 모델을 이용한 유방암 세포 침습성의 정량화. J. Vis. Exp. (2014).
이 비디오는 3D 지하 막 단백질 매트릭스에서 유방암 세포를 성장시키는 상세한 방법론을 제공하여 주변 환경으로의 세포 침입 평가에서 3D 배양의 잠재력을 예시합니다.
Protocol
1. 지하 막 매트릭스에서 유방암 세포의 3 차원 배양 (임베먼트 기술) 마모리겔 지하 멤브레인 매트릭스 처리: 4°C에서 하룻밤 동안 얼음에 해동. 지하 멤브레인 매트릭스는 저온에서 액체이지만 실온에서 고화됩니다. 얼음에 지하 막 매트릭스를 유지(그림 1A-B). 나선형 패턴으로 P-200 Pipetman의 끝을 사용하여 매트릭스를 확산시켜 지하 멤브레인 매트릭스의 5…
Representative Results
그림 1. 지하 막 매트릭스에서 MDA-MB-231 유방암 세포의 3차원 배양 (임베디드 기술). A-B) 실험용 설정의 회로도(연기 후드에서 수행). C) 지하 멤브레인 매트릭스의 50 μl로 코팅 유리 바닥 접시의 우물. D) 접시(es)는 세포 배양 인큐베이터(37°C에서 5% CO2)에 배치되어 매트릭스가 적어도 30분 동안 고화되는 것을 허용하였다. F) ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citazione di questo articolo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).