Ensayo de membrana del sótano de cultivo 3D: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Cvetković, D., et al. Cuantificación de la invasión celular del cáncer de mama mediante un modelo tridimensional (3D). J. Vis. Exp. (2014).
Este video proporciona una metodología detallada para cultivar células de cáncer de mama en una matriz de proteína de membrana del sótano 3D, ejemplificando el potencial del cultivo 3D en la evaluación de la invasión celular en el entorno circundante.
Protocol
1. Cultivo tridimensional de células de cáncer de mama en matriz de membrana del sótano (la técnica de inserción) Manejo de la matriz de membrana del sótano Matrigel: Descongelar en hielo durante la noche a 4 °C. La matriz de membrana del sótano es líquida a baja temperatura, pero se solidifica a temperatura ambiente. Mantener la matriz de membrana del sótano sobre hielo (Figuras 1A-B). Cubra el plato confocal nº 1 de fondo de vidrio con 50 μl de matriz d…
Representative Results
Figura 1. Cultivo tridimensional de células de cáncer de mama MDA-MB-231 en matriz de membrana del sótano (la técnica de incrustación). A-B) Un esquema de la configuración experimental (realizado en el capó del humo). C) El pozo del plato con fondo de vidrio recubierto con 50 μl de matriz de membrana del sótano. D) Se intentaron colocar platos en una incubadora de cultivo celular (a 37 °C con 5% de CO2) para per…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citazione di questo articolo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).