3D-Kultur-Keller-Membran-Assay: Kultivieren von Krebszellen auf 3D Basement Membrane Protein Matrix zur Untersuchung der Zellinvasion
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Cvetkovic, D., et al. Quantifizierung der Brustkrebszell-Invasiveness mit einem dreidimensionalen (3D) Modell. J. Vis. Exp. (2014).
Dieses Video bietet eine detaillierte Methodik zum Wachstum von Brustkrebszellen in einer 3D-Kellermembran-Proteinmatrix, die das Potenzial der 3D-Kultur bei der Bewertung der Zellinvasion in die Umgebung veranschaulicht.
Protocol
1. Dreidimensionale Kultur von Brustkrebszellen in Basement Membrane Matrix (The Embedment Technique) Handhabung der Matrigel-Kellermembranmatrix: Über Nacht bei 4 °C auf Eis auftauen. Die Kellermembranmatrix ist bei niedriger Temperatur flüssig, erstarrt aber bei Raumtemperatur. Kellermembranmatrix auf Eis halten (Abbildungen 1A-B). Bedecken Sie die konfokale Glasbodenschale Nr.1 mit 50 l Kellermembranmatrix, indem Sie die Matrix mit der Spitze eines P-200 Pipetm…
Representative Results
Abbildung 1. Dreidimensionale Kultur von MDA-MB-231 Brustkrebszellen in der Kellermembranmatrix (die Einbettungstechnik). A-B) Ein Schaltplan des Versuchsaufbaus (durchgeführt in der Dunstabzugshaube). C) Der Brunnen der Glasbodenschale, der mit einer Kellermembranmatrix von 50 l beschichtet ist. D) Dish(en) in einem Zellkultur-Inkubator (bei 37 °C mit 5% CO2) platziert, damit die Matrix für mindestens 30 min verfestig…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citazione di questo articolo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).