Journal
/
Bio-ingénierie
/
In vitro Seleção de Repressores Transcricionais Projetados para Silenciamento Epigenético Direcionado
Journal JoVE
Bio-ingénierie
This content is Free Access.
Journal JoVE Bio-ingénierie
In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing

In vitro Seleção de Repressores Transcricionais Projetados para Silenciamento Epigenético Direcionado

DOI:
10.3791/64403-v

•

10:44 min

•

May 05, 2023

•

, , , , , , ,
1San Raffaele Telethon Institute for Gene Therapy (SR-Tiget),IRCCS San Raffaele Scientific Institute, 2Center for Omics Sciences,IRCCS San Raffaele Institute, 3Institute for Biomedical Technologies,National Research Council, 4Vita-Salute San Raffaele University

Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
  • 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
  • 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
  • 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
  • 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
  • 09:23Conclusion

Summary

Traduction automatique

Traduction automatique

Aqui, apresentamos um protocolo para a seleção in vitro de repressores transcricionais projetados (ETRs) com alta, longa duração, estável, eficiência de silenciamento no alvo e baixa atividade fora do alvo em todo o genoma. Esse fluxo de trabalho permite reduzir um repertório inicial e complexo de ETRs candidatos a uma lista curta, adequada para avaliação adicional em cenários terapeuticamente relevantes.

Tags

Epigenetic SilencingGene SilencingArtificial NucleasesEngineered Transcriptional RepressorsChromatin CompactionTranscriptional InhibitionGene DisruptionRNA InterferenceB2M GeneCRISPR Cas9Nucleofection

Article

Embed

AJOUTER À LA PLAYLIST

Usage Statistics

Vidéos Connexes

Extração de lipídeos celulares para Targeted diluição de isótopos estáveis ​​Líquido Análise Espectrometria de Massa-Cromatografia

Técnica Cirúrgica para a Implantação de engenharia de tecidos enxertos vasculares e Subsequente<em> In Vivo</em> Monitoring

Produção, Caracterização e usos potenciais de uma mucosa esofágica Modelo 3D Human Tissue-engenharia

Irritação dos olhos Test (EIT) para identificação de perigos de olho irritantes químicos usando reconstruída Humano Córnea-like epitelial (RHCE) Modelo Tissue

Projetado retalho do músculo vascularizada

A Tissue Combinada 3D Engineered<em> In Vitro</em> /<em> In Silico</em> Modelo de tumor de pulmão para prever a eficácia da droga em fundos específicos de mutação

Targeted Plasma Membrane entrega de um hidrofóbica Carga encapsulado em um cristal líquido nanopartículas Transportador

A<em> In Vitro</em> Modelo Cultura Órgão da Murino Intervertebral Disc

Produção de geneticamente modificados Hamsters sírios dourados por injeção pró-nuclear do complexo CRISPR/Cas9

Reprimir a transcrição do Gene redirecionando maquinaria celular com modificadores epigenéticas químicas

Read Article