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Investigação do papel transcricional de um silenciador intrônico RUNX1 por crispr/Cas9 Ribonucleoproteína em células de leucemia mielóide aguda
Journal JoVE
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Investigation of the Transcriptional Role of a RUNX1 Intronic Silencer by CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein in Acute Myeloid Leukemia Cells

Investigação do papel transcricional de um silenciador intrônico RUNX1 por crispr/Cas9 Ribonucleoproteína em células de leucemia mielóide aguda

DOI:
10.3791/60130-v

•

09:16 min

•

September 01, 2019

•

, , , ,
1Blood Cancer Cytogenetics and Genomics Laboratory, Department of Anatomical and Cellular Pathology, Prince of Wales Hospital,The Chinese University of Hong Kong, 2State Key Laboratory in Oncology in South China,The Chinese University of Hong Kong

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 01:16crRNA Design and Preparation of Cas9/gRNA RNP Complexes
  • 02:16Electroporation of RNP Complexes into OCI-AML3 Cells
  • 03:12Screening and Selection of Cell Clones with Biallelic Deletions
  • 05:51Functional Analyses of Silencer Deletions with Real-time Quantitative RT-PCR
  • 07:18Results: RUNX1 Intronic Silencer Deletion
  • 08:16Conclusion

Summary

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A entrega direta de complexos de ribonucleoproteína de RNA de Cas9/guia pré-montados é um meio rápido e eficiente para a edição de genoma em células hematopoiéticas. Aqui, nós utilizamos esta aproximação para suprimir de um silenciador intronic RUNX1 e para examinar as respostas transcricional em pilhas leucêmicas OCI-AML3.

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Keyword Extraction:RUNX1Intronic SilencerCRISPR/Cas9 RibonucleoproteinAcute Myeloid LeukemiaCis-regulatory ElementsGene ExpressionTranscriptional RoleHematopoietic CellsElectroporationCas9 NucleaseGRNARNP ComplexFragment Analysis

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