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Chapitres
- 00:04Titre
- 00:39Preparation of Crude Mitochondrion from Maize Developing Kernels
- 01:45RNA 5’ Polyphosphatase Treatment and Circularization
- 02:33Reverse Transcription and Normalization
- 03:30PCR Amplification and Determination of Transcript Termini
- 04:34Verification of the cRT-PCR Mapping Results by RNA Gel Blot Hybridization
- 05:00Discrimination of Primary and Processed 5’ Ends
- 05:26Determination of Maize mRNA Termini Using the Circular RT-PCR-based Strategy
- 07:05Conclusion
Presentamos una estrategia circular basada en RT-PCR combinando RT-PCR circular, RT-PCR cuantitativo, tratamiento de polifosfatasa de ARN 5' y mancha norte. Este protocolo incluye un paso de normalización para minimizar la influencia del trifosfato inestable de 5', y es adecuado para discriminar y mapear las transcripciones primarias y procesadas acumuladas establemente en el mitocondrion de maíz.
