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核糖体组蛋白的体外泛化和二次基质测定
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Biochimie
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Biochimie
In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones
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核糖体组蛋白的体外泛化和二次基质测定
DOI:
10.3791/59385-v
•
11:36 min
•
July 25, 2019
•
Louis Masclef*
1
,
Uriarte Maxime*
1
,
Oumaima Ahmed
,
Nadine Sen Nkwe
,
Haithem Barbour
,
Nicholas V.G. Iannantuono
,
Amina Boubekeur
,
Salima Daou
2
,
El Bachir Affar
2
1
Maisonneuve-Rosemont Hospital Research Center and Department of Medicine
,
University of Montréal
,
2
Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute
,
Sinai Health System
Chapitres
00:04
Titre
01:01
GSH-agarose Affinity Purification of the GST-RING1B(1-159)-BMI1 (1-109) E3 Ubiquitin Ligase Complex
02:16
Purification of the BAP1/DEUBAD (ASXL2) Deubiquitinase Complex
04:58
Purification of the Nucleosomes from HEK293T Cells
07:38
Nucleosome Ubiquitination Assay Using BMI1/RING1B E3 Ubiquitin Ligase Complex and In Vitro Nucleosomal H2A DUB Assay Using BAP1/DEUBAD
09:05
Results: Purification, Ubiquitination, and Deubiquitination
10:40
Conclusion
Summary
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泛化是一种翻译后修饰,在细胞过程中起着重要作用,并且通过二足化进行紧密协调。两种反应的缺陷是人体疾病的基础。我们提供使用纯化成分在体外进行泛化和二次脱体反应的协议。
Tags
In Vitro Ubiquitination
Deubiquitination
Nucleosomal Histones
Purified Components
Ubiquitination Mechanisms
Deubiquitination Mechanisms
Enzyme Mutations
Human Disease
High-throughput Screening
Small Molecule Inhibitors
Therapeutics
Bacteria Lysis
PMSF
Antiprotease Cocktail
GSH Beads
Chromatography Column
Glutathione
His-BAP1
MBP-DEUBAD
Nickel NTA Beads
Imidazole
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