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Basati su CRISPR-Cas9 genoma ingegneria per generare modelli di Jurkat Reporter per infezione da HIV-1 con integrazione Proviral selezionati siti
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Chapitres
- 00:04Titre
- 00:42Choice of Targeted Locus, Guide RNA (gRNA), and Targeting Vector Design
- 03:08CRISPR-Cas9-based Targeting of Jurkat Cells
- 04:36Generation of Clonal Lines and Screening for Correct Targeting
- 07:50Screening of Single-cell Clones by Flow Cytometry and PCR
- 11:46Results: Screening and Analysis of Single-cell Clones for Correct Reporter Integration
- 13:16Conclusion
Vi presentiamo un flusso di lavoro ingegneria di genoma per la generazione di nuovi modelli in vitro per infezione da HIV-1 che ricapitolano integrazione proviral a selezionati siti genomici. Targeting dei reporter HIV-derivato è facilitato dalla manipolazione del genoma CRISPR-Cas9-mediata, site-specific. Sono disponibili protocolli dettagliati per cella singola clone generazione, lo screening e la corretta verifica targeting.
