Using a Fluorescent PCR-capillary Gel Electrophoresis Technique to Genotype CRISPR/Cas9-mediated Knockout Mutants in a High-throughput Format

Muhammad Khairul Ramlee; Jing Wang; Alice M. S. Cheung; Shang Li

doi:10.3791/55586

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Usando uma técnica de PCR fluorescente-capilar Electroforese em Gel de genótipo CRISPR / cas9 mediada KO mutantes em um formato de elevado rendimento

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Using a Fluorescent PCR-capillary Gel Electrophoresis Technique to Genotype CRISPR/Cas9-mediated Knockout Mutants in a High-throughput Format

Usando uma técnica de PCR fluorescente-capilar Electroforese em Gel de genótipo CRISPR / cas9 mediada KO mutantes em um formato de elevado rendimento

DOI:

10.3791/55586-v

•

08:25 min

•

April 08, 2017

•

Muhammad Khairul Ramlee, Jing Wang, Alice M. S. Cheung, Shang Li

¹Cancer & Stem Cell Biology Programme,Duke-NUS Medical School

Chapitres

00:05Titre
00:55Sample Preparation and Amplification of CRISPER/Cas9 Regions with Fluorescent PCR
04:32Capillary Gel Electrophoresis and Electropherogram Analysis
06:25Results: Genotyping HEPG2 Targeted with CRISPER/Cas9 Construct Against NAP1L1
07:27Conclusion

Summary

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A técnica de genotipagem descrito aqui, que acopla reacção em cadeia da polimerase fluorescente (PCR) para electroforese em gel capilar, permite a genotipagem de alto rendimento de clones knockout mediada por nucleases. É contorna as limitações enfrentadas por outras técnicas de genotipagem e é mais rentável do que os métodos de sequenciação.

Usando uma técnica de PCR fluorescente-capilar Electroforese em Gel de genótipo CRISPR / cas9 mediada KO mutantes em um formato de elevado rendimento

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