Summary

Un modèle modifié de douleur inflammatoire pour étudier l’effet analgésique chez la souris

Published: November 15, 2024
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Summary

Ici, nous présentons un modèle modifié de douleur inflammatoire avec l’injection de carraghénane des deux pattes arrière pour évaluer l’effet analgésique.

Abstract

Le test de la plaque chauffante est largement utilisé pour évaluer les effets analgésiques sur la douleur inflammatoire chez la souris. Un modèle couramment utilisé de douleur inflammatoire a été induit par une injection intraplantaire de carraghénane dans une patte arrière. Cependant, les résultats de notre laboratoire ont montré que les souris ayant reçu une injection de carraghénane sur une seule patte arrière levaient leurs pattes pour éviter la nociception thermique pendant le test de la plaque chauffante. En raison de cette réponse, la méthode d’injection précédente ne peut pas refléter avec précision le seuil de douleur thermique. Ainsi, nous avons étudié une nouvelle méthode pour éviter ce problème. Dans la présente étude, nous avons modifié la méthode précédente en injectant du carraghénane dans les deux pattes arrière pour établir le modèle de la douleur inflammatoire. Les résultats ont démontré que l’injection de carraghénane sur les deux pattes arrière était sensible et qu’il s’agissait d’une meilleure méthode pour induire une douleur inflammatoire lors de l’utilisation du test de la plaque chauffante que l’injection sur une seule patte arrière. Sur la base de ces résultats, nous avons conçu d’autres expériences dans lesquelles des souris avec une injection de carraghénane à la patte arrière ou à une patte arrière ont été traitées par voie intragastrique avec du célécoxib (30 mg / kg). Les résultats de l’essai sur plaque chauffante ont montré que le célécoxib augmentait le seuil de douleur thermique chez les souris avec l’injection de carraghénane sur les deux pattes arrière, mais pas chez les souris avec l’injection de carraghénane sur une seule patte arrière. En résumé, nous avons développé une méthode supérieure pour induire un modèle de douleur inflammatoire afin d’évaluer l’effet analgésique.

Introduction

La douleur est un problème de santé publique dans le monde entier. Il est déclenché par une stimulation thermique, mécanique ou chimique nocive. Il est difficile d’effectuer des études sur la douleur chez l’homme pour des raisons éthiques. Par conséquent, l’utilisation de modèles animaux de la douleur est une approche clé pour comprendre les mécanismes de la douleur et rechercher des traitements1. Le test de la plaque chauffante a été largement utilisé pour l’évaluation de la nociception thermique et de l’hyperalgésie2. Actuellement, le modèle de douleur inflammatoire utilisé pour le test de la plaque chauffante est induit par une injection intraplantaire de carraghénane dans une patte arrière. Par exemple, pour étudier l’effet antinociceptif des microsphères chargées de rotigotine, un modèle animal de douleur inflammatoire a été préparé par injection d’une seule patte arrière3. Pour évaluer les effets des inhibiteurs de la catéchol-o-méthyl-transférase sur la nociception thermique chez la souris, le carraghénane a été administré dans la région plantaire de la patte arrière droite4. Pour étudier le rôle analgésique de l’extrait de Posidonia oceanica (L.) Delile, un modèle de douleur inflammatoire a été préparé chez la souris par injection intraplantaire de carraghénane dans la patte arrière droite5. Cependant, les résultats de notre laboratoire ont montré qu’une souris avec l’injection de carraghénane sur une seule patte arrière lèverait sa patte pour éviter la nociception thermique, ce qui prolonge de manière inexacte la réponse de l’animal à un stimulus thermique dans le test de la plaque chauffante. Ainsi, nous avons émis l’hypothèse que le modèle de douleur inflammatoire avec l’injection de carraghénane sur une seule patte arrière ne pouvait pas refléter avec précision le seuil de douleur thermique. Par conséquent, nous avons optimisé la méthode en injectant du carraghénane dans les deux pattes arrière pour établir un modèle de douleur inflammatoire modifié.

Les souris soumises à une injection de carraghénane sur les deux pattes arrière n’avaient aucun moyen d’éviter le stimulus thermique pour les deux pattes arrière en même temps. Le seuil de douleur a été défini comme le temps écoulé entre le moment où la souris a été placée sur la plaque chauffante et celui où la souris a léché l’une ou l’autre des pattes arrière. Les résultats ont confirmé que le modèle modifié de douleur inflammatoire est plus adapté à l’évaluation du seuil de température nociceptive. Cela pourrait améliorer l’efficacité du test de la plaque chauffante pour la recherche et le développement de médicaments analgésiques.

Protocol

Le protocole expérimental a été approuvé par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université Yantai (No. YTDX20220425). Les procédures ont suivi les directives des National Institutes of Health pour l’utilisation d’animaux de laboratoire. 1. Animaux Utilisez des souris femelles ICR pesant 20 à 25 g pour les expériences. Laissez les animaux s’acclimater à l’environnement de la salle d’expérimentation pendant 3 jours avant de commencer les expériences. Maintenez la salle d’expérimentation avec un cycle lumière-obscurité de 12 heures et fournissez aux souris un accès gratuit à l’eau et à la nourriture. 2. Préparation de la solution de carraghénane Peser 0,1 g de carraghénane. Ajouter 10 ml de solution saline normale stérilisée dans un tube. Ajoutez 0,1 g de carraghénane dans le tube et agitez le tube pendant 30 s. Recueillir la solution de carraghénane stérilisée à 1 %. Préparez la solution de carraghénane avant les expériences. 3. Injection intraplantaire de carraghénane À l’aide d’une seringue (0,05 ml, 29 g x 1/2 pouce, 0,33 mm × 12,7 mm) injectez la solution de carraghénane à 1 %. Agitez la solution de carraghénane avant de l’aspirer dans la seringue. Assurez-vous qu’il n’y a pas de bulle dans la seringue. Désinfectez le site d’injection (patte arrière) avec de l’alcool à 75 %. Injecter 30 μL 6,7 de solution de carraghénane à 1% par voie sous-cutanée dans la surface plantaire de la patte arrière. Pour les souris du groupe témoin, injecter 30 μL de solution saline normale.Insérez l’aiguille en diagonale vers le haut dans le coussinet de la patte arrière. Maintenez la stabilité de la seringue. Après l’injection, retirez lentement la seringue et appuyez sur le site d’injection pendant 2 s pour éviter les fuites. 4. Test de plaque chauffante Effectuez le test de la plaque chauffante 3 h après l’injection intraplantaire. Nettoyez et désinfectez la surface de la plaque chauffante. Démarrez l’appareil à plaque chauffante. Cliquez sur le bouton Mode de température . Cliquez sur CONSTANT pour régler la température à 55 ± 0,2 °C. Cliquez sur le bouton Démarrer l’expérience, puis sur REACH. Prenez une souris dans le conteneur d’hébergement. Saisissez doucement sa trompe. Placez la souris au centre de la plaque chauffante. Cliquez sur DÉMARRER. Observez et notez le temps de léchage de la patte arrière gauche (pour les souris avec injection à une patte arrière) ou de la patte arrière (pour les souris avec injection des deux pattes arrière) en réponse à la stimulation thermique. Appuyez sur la pédale de la plaque chauffante pour voir l’heure sur l’écran de la plaque chauffante. Définissez le seuil de douleur comme le temps écoulé entre le moment où la souris est placée sur la plaque chauffante et celui où elle lèche la patte arrière. Fixez une limite de 60 s pour le test de la plaque chauffante 4,8,9. Enregistrez un seuil de douleur de 60 s si la limite est atteinte.REMARQUE : Nettoyez l’appareil de la plaque chauffante avec de l’alcool à 75% avant de placer la souris suivante pour éviter un biais possible dû à l’odeur résiduelle de la souris précédente. 5. Préparation de la suspension de célécoxib à 1,5 mg/mL Prendre 1 gélule contenant 200 mg de célécoxib. Prenez le contenu de la capsule et broyez-la en poudre. Ajouter 0,5 % de carboxyméthylcellulose de sodium. Le volume final est de 13,3 ml. Il s’agit de la suspension en magasin du célécoxib. Prendre 1 mL de célécoxib, une suspension en magasin. Ajouter 9,0 mL de carboxyméthylcellulose sodique à 0,5 % pour obtenir 1,5 mg/mL de suspension de célécoxib. Administrer 0,2 mL/10 g de la suspension de célécoxib par voie intragastrique aux souris.REMARQUE : Choisissez une aiguille de gavage de 4,0 à 4,5 cm de longueur pour les souris pesant 20 à 25 g. 6. Évaluation du modèle modifié de douleur inflammatoire Divisez au hasard les souris femelles ICR en trois groupes : les groupes témoins, modèles et célécoxib. Injecter 30 μL de solution de carraghénane à 1 % par voie sous-cutanée dans la surface plantaire de la patte arrière (une patte arrière ou les deux pattes arrière). Pour les souris du groupe témoin, injecter 30 μL de solution saline normale. Après l’injection de carraghénane ou de solution saline normale, effectuez le traitement immédiatement. Administrer par voie intragastrique le célécoxib à une dose de 30 mg/kg pour les souris du groupe célécoxib. Pour les souris des groupes témoin et modèle, administrer par voie intragastrique 0,5 % de carboxyméthylcellulose sodique. Effectuer le test sur plaque chauffante (section 2) 3 h après l’injection de carraghénane. 7. Méthodes statistiques Présentez les résultats expérimentaux sous forme de moyenne ± d’écart-type. Effectuez un test de distribution de normalité avec le test statistique de qualité de l’ajustement de Kolmogorov-Smirnov. Analysez la comparaison entre les deux groupes à l’aide d’un test t non apparié. Effectuez plusieurs comparaisons de groupes à l’aide d’une analyse de variance à un facteur suivie du test de Dunnett. Considérons la valeur de p < 0,05 comme statistiquement significative.

Representative Results

Le seuil de douleur dans les modèles de douleur inflammatoireLe seuil de douleur du modèle de douleur inflammatoire avec injection de carraghénane sur une seule patte arrière était de 32,23 ± 11,11 s, tandis que le seuil de douleur du groupe témoin était de 27,73 ± 7,08 s. Par rapport au groupe témoin, le seuil de douleur du modèle d’injection à une patte arrière n’a pas montré de réduction significative (p > 0,05, Figure 1A</s…

Discussion

La douleur est une réponse protectrice déclenchée par des lésions ou des lésions tissulaires. Cependant, il a également un impact négatif sur la qualité de vie10. Par conséquent, le développement d’analgésiques efficaces et l’exploration des mécanismes de la douleur restent des domaines de recherche actifs. Les méthodes d’évaluation de la douleur jouent un rôle clé dans le développement des médicaments analgésiques. L’injection de carrag…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous remercions Lesley McCollum, PhD, de Liwen Bianji (Edanz) (www.liwenbianji.cn), pour avoir édité le texte anglais d’une ébauche de ce manuscrit.

Materials

AL204 electronic balance Yuheng Battery Co., Ltd  YH-400A
Carboxymethylcellulose Tianjin Chemical Co., Ltd  20210326
Carrageenan Sigma, MO, USA 29H0715
Celecoxib Pfizer Inc. 8142838
Hot plate  UGO Ltd. Co., Italy PB-200 
ICR female mice Jinan Pengyue  Co., Ltd. SCXK20220007
Normal saline Kelun Pharmaceutical Co., Ltd  H51021157

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Citer Cet Article
Huiwen, L., Baiyang, Z., Yongkang, W., Xue, J., Jiren, Z., Pinyuan, Z., Tian, W. A Modified Inflammatory Pain Model to Study the Analgesic Effect in Mice. J. Vis. Exp. (213), e66701, doi:10.3791/66701 (2024).

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