ב גיבוש biofilm חוץ גופית ב 8-Slide גם לשכת
Summary
מאמר זה מתאר את הליך הקמת ויזואליזציה של biofilm חיידקי גדל בתוך שקופית 8-גם תא
Abstract
האופי הכרוני של מחלות רבות מיוחסת היווצרות של biofilms חיידקי אשר הסרבן כדי טיפול אנטיביוטי מסורתי. Biofilms הם הקהילה הקשורים חיידקים מצורף משטח ו עטוף מטריצה. תפקידה של המטריצה תאיים הוא רב פנים, כולל הקלת רכישת מזין, מציעה הגנה משמעותית נגד לחצים סביבתיים (למשל, התגובות מארח החיסונית). במאמץ להשיג הבנה טובה יותר באשר לאופן החיידקים בתוך biofilm להגיב מדגיש הסביבה השתמשנו פרוטוקול שבו אנו לחזות biofilms חיידקים אשר נוצרו בשקופית 8-היטב קאמרית. Biofilms הוכתמו BacLight Live / Dead כתם ובדק באמצעות מיקרוסקופ confocal כדי לאפיין את גודל biofilm יחסית, ומבנה תחת תנאים משתנים הדגירה. Z-מחסנית תמונות נאספו באמצעות מיקרוסקופיה confocal ונותחו על ידי סטטמ"מ. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לעזור להבהיר את מנגנון קינטיקה על ידי היוצרים biofilms, כמו גם לזהות את המרכיבים שחשובים מבנה biofilm ויציבות.
Protocol
Discussion
הבנת המנגנון שבאמצעותו biofilms הטופס, כמו גם באפיון רכיבי המטריצה שלהם, הוא תחום עניין רב. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לזהות חלבונים או מרכיבים אחרים שתורמים שלמות מבנית של biofilm, וכן לסייע בזיהוי יעד חלבונים אשר עשויים להשאיל את עצמם ביישום הטיפולי.
פעמים הדגירה ו דילולים בפרוטוקול לעיל הוקמו ליצירת biofilm אופטימלי על ידי nontypeable Haemophilus influenzae (NTHI). עבודה חלק ראשוני עשוי להיות נחוץ כדי לייעל את הפעולות הבאות עבור מינים חיידקים אחרים (דילול ראשוני כלומר זמן הדגירה הדרושה להשגת שלב אמצע יומן צמיחה). דילול 1:2500 עבור זריעת הראשונית של התאים הוקמה על מנת להבטיח כי biofilm חזקים יפתחו בחדר שקופיות הנגרמת על ידי אורגניזם הזה ובתוך פעמים הדגירה כאמור, ללא biofilm overgrowing החדר ו / או מתיש מזינים זמין . לפיכך, דילול ראשוני או פעמים הדגירה ייתכן שיהיה צורך מותאם זן חיידקים אחרים.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
העבודה מומן על ידי NIDCD / NIH R01DC003915 אל LO Bakaletz.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chocolate II agar | Fisher | B21267X | ||
| 8-well chamber slides | Fisher | 12-656-18 | ||
| BacLight Live/Dead bacterial viability kit | Fisher | NC9439023 | ||
| BHI | Fisher | 211059 | ||
| Hemin | Sigma | H5533 | ||
| β-NAD | Sigma | N7004 | ||
| Permaslip mounting media | Fisher | NC9693613 |
References
- Bakaletz, L. O. Bacterial biofilms in otitis media: evidence and relevance. Pediatr Infect Dis J. 26, S17-S19 (2007).
- Heydorn, A., Nielsen, A. T., Hentzer, M., Sternberg, C., Givskov, M., Ersboll, B. K., Molin, S. Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT. Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).
