Placage RNAi pour l’alimentation de C. elegans : Une technique pour induire l’expression cible dsRNA dans E. coli

Published: April 30, 2023

Abstract

Source: Kolundzic, E., et autres. Application de l’ARNi et de l’expression du facteur de transcription induite par le choc thermique pour reprogrammer les cellules germinales aux neurones de C. elegans. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit les principes derrière le traitement RNAi dans C. elegans et démontre un protocole pour abattre lin-35 dans une souche de ver transgénique.

Protocol

Ce protocole est extrait de Kolundzic, et coll., Application of RNAi and Heat-shock-induit Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans, J. Vis. Exp. (2018). Préparation des solutions Plaques NGM-Agar (1 L) Ajouter 3 g de NaCl, 2,5 g de peptone (p. ex., Bacto-Peptone) et 20 g …

Representative Results

Figure 1 : Phénotype de Pvul provoqué par RNAi contre lin-53. (En haut) Image DIC des vers de descendance F1 de stade L4/jeune adulte dérivés de la lutte ou des mères traitées par lin-53 RNAi. Barres d’échelle = 20 μm. (Bottom) Les animaux traités avec lin-53 RNAi affichent la vulve saillante(pvul)phénotype (têtes de flèches noires). Le phénotype de pvul …

Materials

Chemicals 
Agar-Agar, Kobe I Roth 5210.1
Bactopeptone  A. Hartenstein GmbH 211 677 Peptone Media 
Yeast extract  AppliChem A1552,0100
Amphotericin B USBiological A2220
CaCl2 Merck Biosciences 208290
Cholesterol Roth 8866.2
Gelatine Roth 4275.3
IPTG Sigma 15502-10G
K2PO4 Roth T875.2
KH2PO4 Roth  3904.2
MgSO4 VWR 25,163,364
Na2HPO4 Roth P030.1
NaCl Roth 9265.1
NaClO Roth 9062.3
NaOH (5 N) Roth  KK71.1
Tris Roth AE15.2
Carbenicillin Roth 634412
Tetracycline Roth 2371.2
Incubators
Incubator  Sanyo MIR-5 5534210 for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C
Microscopes
Stereomicroscope SMZ745 Nikon
Bacterial strains
Escherichia coli HT115 F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus).
Escherichia coli OP50  Uracil auxotroph E. coli strain
Worm strains
BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V. derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2
RNAi Clones
lin-53 SourceBioscience ID I-4D14 Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12
empty vetor: L4440 Addgene  #1654

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Citer Cet Article
RNAi Plating for C. elegans Feeding: A Technique to Induce Target dsRNA Expression in E. coli. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20138, doi: (2023).

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