RNAi الطلاء لتغذية C. elegans: تقنية للحث على التعبير dsRNA الهدف في E. القولونية
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: كولوندزيك، إ. وآخرون. تطبيق RNAi والحرارة الناجمة عن الصدمة التعبير عامل النسخ لإعادة برمجة الخلايا الجرثومية إلى الخلايا العصبية في C. elegans. ج. فيس إكسب. (2018).
يصف هذا الفيديو المبادئ الكامنة وراء علاج RNAi في C. elegans ويوضح بروتوكولا لضرب lin-35 في سلالة دودة معدلة وراثيا.
Protocol
هذا البروتوكول مقتطف من Kolundzic، وآخرون، تطبيق RNAi والحرارة الناجمة عن الصدمة التعبير عامل النسخ لإعادة برمجة الخلايا الجرثومية إلى الخلايا العصبية في C. elegans، J. Vis. Exp. (2018). إعداد الحلول لو…
Representative Results
الشكل 1: النمط الظاهري Pvul الناجم عن RNAi ضد لين-53. (أعلى) DIC صورة L4/ الشباب مرحلة الكبار F1 الديدان ذرية المستمدة من السيطرة أو لين-53 RNAi تعامل الأمهات. أشرطة المقياس = 20 ميكرومتر (القاع) الحيوانات تعامل مع لين-53 RNAi عرض الفرج ?…
Materials
| Chemicals | |||
| Agar-Agar, Kobe I | Roth | 5210.1 | |
| Bactopeptone | A. Hartenstein GmbH | 211 677 | Peptone Media |
| Yeast extract | AppliChem | A1552,0100 | |
| Amphotericin B | USBiological | A2220 | |
| CaCl2 | Merck Biosciences | 208290 | |
| Cholesterol | Roth | 8866.2 | |
| Gelatine | Roth | 4275.3 | |
| IPTG | Sigma | 15502-10G | |
| K2PO4 | Roth | T875.2 | |
| KH2PO4 | Roth | 3904.2 | |
| MgSO4 | VWR | 25,163,364 | |
| Na2HPO4 | Roth | P030.1 | |
| NaCl | Roth | 9265.1 | |
| NaClO | Roth | 9062.3 | |
| NaOH (5 N) | Roth | KK71.1 | |
| Tris | Roth | AE15.2 | |
| Carbenicillin | Roth | 634412 | |
| Tetracycline | Roth | 2371.2 | |
| Incubators | |||
| Incubator | Sanyo MIR-5 | 5534210 | for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C |
| Microscopes | |||
| Stereomicroscope | SMZ745 | Nikon | |
| Bacterial strains | |||
| Escherichia coli HT115 | F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus). | ||
| Escherichia coli OP50 | Uracil auxotroph E. coli strain | ||
| Worm strains | |||
| BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V. | derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2 | ||
| RNAi Clones | |||
| lin-53 | SourceBioscience | ID I-4D14 | Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12 |
| empty vetor: L4440 | Addgene | #1654 |
Citer Cet Article
RNAi Plating for C. elegans Feeding: A Technique to Induce Target dsRNA Expression in E. coli. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20138, doi: (2023).