Orthotopische injectie in het borstvetkussen: borstkanker bij muizen vaststellen

Dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de bepaling en algemene aanbeveling van de Chinese wetgeving inzake de toediening van proefdieren en werden goedgekeurd door het Institution of Animal Care and Use Committee van capital medical university (ref. AEEI-2014-052). Vrouwelijke Balb/c muizen in de leeftijd van 6 tot 8 weken werden gebruikt.

1. Bereiding van cellen en dieren

1. Scheer het haar een dag voor de operatie rond de vierde tepels om het operatiegebied bloot te leggen.
   1. Gebruik één hand om de muis stevig aan de achterkant vast te houden om ervoor te zorgen dat de muis niet vrij kan bewegen, draai de muis omhoog om zijn buik aan de operator bloot te stellen en gebruik vervolgens een andere hand om de vacht rond de vierde tepels te scheren met een elektronisch scheerapparaat.
   2. Doe een dun laagje ontharingscrème rond de tepels voor 30 - 60 s, maak de crème schoon met gedestilleerd water en droog de muis vervolgens met zacht papier.
2. Verzamel op de dag van de operatie muriene borstkankercellen (4T1-luc2), tel het celnummer en pas de celdichtheid aan tot 2 x 10⁵ cellen/ml in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) in steriele microcentrifugebuizen en houd ze op ijs. Voor elke muis wordt 1 x 10⁴ cellen/50 μL in een spuit van 1 ml bereid.

2. Orthotopische injectie

1. Anesthesie van muizen
   1. Anesthesie opwekken. Doe de muizen in een gesloten transparante container en zet 2% isofluraangas aan om de muizen ongeveer 5 minuten te verdoven, totdat ze allemaal gaan liggen en in slaap vallen.
   2. Zorg voor anesthesie. Breng de muizen over van de container naar individuele anesthesiemaskers, doe wat dierenartszalf op hun ogen om uitdroging te voorkomen, houd de muizen supinely met hun tepels blootgesteld aan de operator en laat ze een paar minuten isofluraangas blijven inademen totdat de injectie is uitgevoerd.
   3. Bevestig het succes van anesthesie door het ontbreken van een teenknijpontwenningsreflex.
   4. Breng oogzalf aan op de ogen van de muizen om uitdroging van de ogen te voorkomen.
      OPMERKING Afhankelijk van de containergrootte en het aantal beschikbare individuele anesthesiemaskers, kan een groep muizen samen worden verdoofd en één voor één onder individuele anesthesie worden geïnjecteerd.
2. Prestaties van de injectie
   1. Gebruik één hand om de huid rond de vierde tepel op te stoken met een pincet, om een opgetilde "tunnel" op te zetten voor de spuit om te volgen. Gebruik de andere hand om de spuit vast te houden met de naald naar boven gedraaid om de huid subcutaan binnen te komen op 5 - 10 mm van de tepel; volg vervolgens de "tunnel" totdat de naaldpunt dicht bij de tepel komt, beweeg de naaldpunt voorzichtig omhoog in het borstvetkussen totdat het naaldoog onder de tepelpunt komt, gooi het pincet weg en injecteer de cellen langzaam.
   2. Draai de naald een beetje om en trek de spuit langzaam in; gebruik een wattenstaafje om de naaldwond 10 - 20 s in te drukken om er zeker van te zijn dat er geen vochtsijpeling is.
   3. Let op de vierde tepel om een succesvolle injectie te bevestigen: één witte transparante platte bol met de tepel als midden kan worden waargenomen (Figuur 1).
3. Houd de muizen nog een minuut verdoofd om te voorkomen dat de muizen herstellen en te snel bewegen, waardoor de injectiewond opengaat en de tumorcellen uitlekken.

Figuur 1: Foto's voor en na de orthotopische injectie bij het borstvetkussen van vrouwelijke Balb/c muizen. De operatie werd uitgevoerd en de foto's werden genomen terwijl de muizen onder isofluraan anesthesie waren. A, vóór injectie, B, nainjectie.