Ortopisk injektion i Mammary Fat Pad: Etablering af brystkræft hos mus

Dyreforsøg blev udført i overensstemmelse med bestemmelsen og den generelle anbefaling af den kinesiske lovgivning om forvaltning af forsøgsdyr og blev godkendt af Institution of Animal Care and Use Committee of Capital Medical University (ref no. AEEI-2014-052). Kvindelige Balb/c mus i alderen 6 til 8 uger blev brugt.

1. Tilberedning af celler og dyr

1. En dag før operationen barberes håret omkring de fjerde brystvorter for at afsløre operationsområdet.
   1. Brug den ene hånd til at holde musen tæt bagpå for at sikre, at musen ikke bevæger sig frit, skru op for musen for at udsætte sin mave for operatøren, og brug derefter en anden hånd til at barbere pelsen omkring de fjerde brystvorter med en elektronisk barbermaskine.
   2. Sæt et tyndt lag hårfjerningscreme omkring brystvorterne i 30 - 60 s, rengør fløden med destilleret vand, og tør derefter musen med blødt papir.
2. På dagen for operationen, indsamle murin brystkræftceller (4T1-luc2), tælle cellenummeret, og justere celletætheden til 2 x 10⁵ celler / mL i fosfat-buffered saltvand (PBS) i sterile mikrocentrifuge rør og holde dem på is. For hver mus fremstilles 1 x 10⁴ celler/50 μL i en 1-mL sprøjte.

2. Ortopisk injektion

1. Anæstesi af mus
   1. Fremkalde anæstesi. Sæt musene i en lukket gennemsigtig beholder og tænd 2% isoflurane gas for at bedøve musene i ca. 5 minutter, indtil de alle ligger ned og falder i søvn.
   2. Opretholde anæstesi. Overfør musene fra beholderen til individuelle anæstesimasker, læg en vis vet salve på deres øjne for at undgå tørhed, hold musene liggende med deres brystvorter udsat for operatøren, og lad dem fortsætte med at indånde isoflurane gas i et par minutter, indtil injektionen er udført.
   3. Bekræft succes anæstesi ved manglen på en tå knivspids tilbagetrækning refleks.
   4. Påfør oftalmisk salve på musenes øjne for at forhindre øjentørhed.
      BEMÆRK! Ifølge beholderens størrelse og antallet af individuelle anæstesimasker til rådighed, kan en gruppe mus bedøves sammen og injiceres en efter en under individuel anæstesi.
2. Injektionens ydeevne
   1. Brug den ene hånd til telt op huden omkring den fjerde brystvorte med pincet, at oprette en opløftet "tunnel" for sprøjten til at følge. Brug den anden hånd til at holde sprøjten med nålen vendt opad for at komme ind i huden subkutanly ved 5 - 10 mm fra brystvorten; følg derefter "tunnelen", indtil nålespidsen kommer tæt på brystvorten, flyt forsigtigt nålespidsen op i brystfedtpuden, indtil nåleøjet kommer under brystvortespidsen, kassér pincet og injicere cellerne langsomt.
   2. Vend nålen lidt rundt og træk sprøjten langsomt tilbage; brug en vatpind til at trykke på nålesåret i 10 - 20 s for at sikre, at der ikke er nogen flydende nedsivning.
   3. Overhold den fjerde brystvorte for at bekræfte en vellykket injektion: en hvid gennemsigtig flad kugle med brystvorten, da midten kan observeres (Figur 1).
3. Hold musene bedøvet i endnu et minut for at undgå at lade musene komme sig og bevæge sig for hurtigt, hvilket vil få injektionssåret til at åbne og tumorcellerne lække ud.

Figur 1: Billeder før og efter den ortopiske injektion på brystfedtpuden hos hunmusene Balb/c. Operationen blev udført, og billederne blev taget, mens musene var under isoflurane anæstesi. A, før injektion, B, efter injektion.