Aqui, descrevemos o método para estabelecer um modelo de cultura de células triplas da barreira hematoencefálica baseado em células endoteliais microvasculares cerebrais humanas primárias, astrócitos e pericitos. Este modelo multicelular é adequado para estudos de disfunção da unidade neurovascular durante acidente vascular cerebral isquêmico in vitro ou para a triagem de candidatos a medicamentos.