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Detecção de acumulação e reparo de lacunas pós-replicativas em células humanas usando o ensaio de fibra de DNA
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JoVE Revista Genética
Detection of Post-Replicative Gaps Accumulation and Repair in Human Cells Using the DNA Fiber Assay

Detecção de acumulação e reparo de lacunas pós-replicativas em células humanas usando o ensaio de fibra de DNA

DOI:
10.3791/63448-v

•

10:32 min

•

February 03, 2022

•

, , ,
1Department of Microbiology, Institute of Biomedical Sciences,University of São Paulo, 2Division of Oncology, Department of Internal Medicine,Washington University in St. Louis

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 01:27S1 Fiber Experimental Setup
  • 03:51DNA Fiber Preparation by Spreading
  • 04:58Immunostaining of DNA Fibers
  • 06:45Image Acquisition and Analysis
  • 08:39Results: Post-Replicative ssDNA Gaps on Ongoing Forks by S1 Fiber Assay and Post-Replicative Repair by Gap Filling
  • 09:42Conclusion

Summary

Traducción Automática

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Aqui descrevemos duas modificações do ensaio de fibra de DNA para investigar lacunas de DNA de uma única vez na replicação do DNA após indução da lesão. O ensaio de fibra S1 permite a detecção de lacunas pós-replicativas usando a endonuclease S1 específica do SSDNA, enquanto o ensaio de preenchimento de lacunas permite visualização e quantificação do reparo de lacunas.

Tags

DNA Fiber AssayPost-replicative GapsS1 NucleaseDNA RepairReplication StressGenome IntegrityUV-C IrradiationCldU IncorporationCSK PermeabilizationDNA Lesion Detection

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