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Modificação química do resíduo de triptofano em um recombinante Ca2+-ATPase N-domínio para estudar triptofano-ANS FRET
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Capítulos
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
O ANS se liga ao domínio N recombinante Ca2+-ATPase. Os espectros de fluorescência exibem um padrão semelhante ao FRET após a excitação em um comprimento de onda de 295 nm. A modificação química mediada pelo NBS de Trp sacia a fluorescência do domínio N, o que leva à ausência de transferência de energia (FRET) entre o resíduo Trp e o ANS.
