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Identification des empreintes de pas de l'ARN: Complexes protéiques par l'intermédiaire de l'immunoprécipitation d'ARN dans Tandem suivi du séquençage (RIPiT-Seq)
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Identification of Footprints of RNA:Protein Complexes via RNA Immunoprecipitation in Tandem Followed by Sequencing (RIPiT-Seq)
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Identification des empreintes de pas de l'ARN: Complexes protéiques par l'intermédiaire de l'immunoprécipitation d'ARN dans Tandem suivi du séquençage (RIPiT-Seq)

DOI:
10.3791/59913-v

•

09:26 min

•

July 10, 2019

•

, ,
1Department of Molecular Genetics, Center for RNA Biology,The Ohio State University

Capítulos

  • 00:04Título
  • 01:40Cell Harvesting and Formaldehyde Treatment
  • 02:50FLAG Immunoprecipitation and RNase I Digestion
  • 04:09Affinity Elution and Magnetic Bead-antibody Conjugation
  • 05:14Second Immunoprecipitation
  • 06:12RNA Extraction and Analysis
  • 07:51Results: RNA and Protein Yields
  • 08:38Conclusion

Summary

Traducción Automática

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Ici, nous présentons un protocole pour enrichir les sites endogènes de liaison d'ARN ou « empreintes » des complexes d'ARN:protéines (RNP) des cellules mammifères. Cette approche implique deux immunoprécipitations des sous-unités de RNP et est donc surnommée immunoprécipitation d'ARN en tandem (RIPiT).

Tags

RNA ImmunoprecipitationRIPiT-SeqRNA-protein ComplexesEpitope-tagged ProteinCRISPRImmunoprecipitationRNA ExtractionHEK293 CellsRNA Binding ProteinsRNA ProcessingDiseasesNeuropathiesCancer

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