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Bioquímica
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光谱分析 TRPV1 的纯化与重构
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Bioquímica
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JoVE Revista
Bioquímica
Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis
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Click here for the English version.
光谱分析 TRPV1 的纯化与重构
DOI:
10.3791/57796-v
•
11:53 min
•
July 03, 2018
•
Francisco J. Sierra-Valdez
,
Richard A. Stein
,
Phanindra Velissety
3
,
Valeria Vasquez
,
Julio F. Cordero-Morales
1
Department of Physiology
,
University of Tennessee Health Science Center
,
2
Department of Molecular Physiology and Biophysics
,
Vanderbilt University Medical Center
,
3
CuriRX, Inc.
Capítulos
00:04
Título
00:54
TRPV1 Mutagenesis
02:19
Generating the Recombinant Bacmid and Baculovirus for Protein Expression
05:14
eTRPV1 and Single-cysteine Mutant Purification
07:18
eTRPV1 Single-cysteine Mutant Site-directed Spin Labeling
08:12
eTRPV1 Spin-labeled Single Cysteine Mutant Reconstitution
09:30
Results: Characterization of the Minimal Cysteine-less TRPV1 Construct and Single-cysteine Mutants used for Spectroscopic Analysis
11:08
Conclusion
Summary
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本文介绍了获得洗涤剂-可溶性 TRPV1 的生化量的具体方法, 用于光谱分析。这些联合协议提供了生物化学和生物物理工具, 可用于促进膜控制环境中哺乳动物离子通道的结构和功能研究。
Tags
TRPV1
Ion Channel
Spectroscopic Analysis
Electron Paramagnetic Resonance
Double Electron Electron Resonance
Conformational Changes
Thermal Gating
Light-independent Gating
PCR Mutagenesis
Recombinant Bacmid
ETRPV1
Cysteine Mutants
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