Injection intraductrice : Injection dans les conduits de la glande mammaire de souris

Une injection intraductrice est une technique de livraison d’un mélange d’injection qui peut contenir des cellules cancéreuses, des vecteurs d’expression, ou un agent thérapeutique complété par un colorant traceur dans les conduits de la glande mammaire.

Pour cette procédure, chargez une seringue avec le mélange d’injection. Ensuite, placez un côté ventral anesthésié de souris vers le haut sur un lit chirurgical. Faire une incision sur la peau entre la paire inguinale ou cinquième de glandes mammaires. Séparez soigneusement le rabat cutané du péritoine pariétal pour visualiser l’arbre ductal.

À l’aide de forceps, soulevez le mamelon et coupez soigneusement sa partie extérieure pour voir l’ouverture du conduit. Utilisez une pince à épiler pour soulever le bord du rabat cutané et insérez doucement l’aiguille de seringue dans le mamelon pour livrer le mélange d’injection. Surveillez le mouvement du colorant traceur dans l’arbre ductal mammaire. Le colorant s’étale dans l’arbre ductal sans s’échapper dans le stroma, ce qui indique une injection réussie.

Attendez quelques secondes pour éviter les déversements, puis retirez lentement l’aiguille du site d’injection. Fermez l’incision avec le clip de la plaie. Dans le protocole suivant, nous effectuerons l’injection intraductrice pour livrer cre exprimant l’adénovirus dans la glande mammaire de souris.

Utilisez des techniques aseptiques tout au long de l’intervention chirurgicale. Faire un site d’incision sur la peau à une longueur d’environ un centimètre entre les deux quatrièmes glandes mammaires inguinales. Séparez soigneusement le rabat cutané du péritoine pariétal, afin de visualiser l’arbre ductal mammaire.

Tenez soigneusement le mamelon avec des forceps horlogers pour enlever le mamelon extérieur sans couper la peau à proximité à l’aide d’un ciseaux de micro-dissection. Chargez environ trois à cinq microlitres du mélange d’injection d’adénovirus Cre dans une seringue Hamilton de 25 microlitres avec une aiguille de moyeu métallique de calibre 33 fixée.

Estimer le volume du mélange d’injection dans la seringue en fonction du colorant bleu inclus dans le mélange. Maintenez doucement le bord du rabat cutané à l’huile fine et incurvée et injectez lentement le mélange d’injection d’adénovirus Cre dans le mamelon tout en surveillant la propagation du colorant bleu dans l’arbre ductal mammaire. Maintenez le taux d’injection aussi lentement que possible pour éviter les dommages au lumen ductal.

Une injection intraductrice réussie est indiquée par des fluides injectés se propageant dans tout l’arbre ductal sans fuite dans le compartiment stromal. Retirez doucement l’aiguille du mamelon pour éviter toute fuite du liquide injecté. Examiner le côté distal de la glande mammaire ou la zone environnante du mamelon injecté.

Le colorant diffusant dans le stroma voisin, comme montré ici, indique une injection mammaire de tampon de graisse plutôt qu’une injection intraductal réussie. Fermez les plaies chirurgicales et la peau avec des pinces à plaies.

Retirez la souris de l’anesthésie et placez-la sur un coussin chauffant à l’intérieur d’une cage propre pour la récupération. Surveiller le développement de la tumeur mammaire tel que décrit dans le protocole de texte.