Zhuang Medicine의 약용 실 뜸 요법 및 원발성 월경통의 냉간 응고 증후군의 쥐 모델에서의 적용

본 연구의 동물실험은 광시중의과대학 동물실험윤리위원회(윤리면허번호 DW20230411-45)의 검토 및 승인을 받았다. 동물 관리 절차는 실험동물 취급에 관한 지침(Guiding Opinion on Treating Experimental Animals, Guo Ke Fa Cai Zi [2006], No. 398)과 국제통증연구회(International Society for Pain Research, IASP)의 동물 보호 및 사용 기준의 내용을 엄격히 따릅니다. 참고: 이 연구에서는 생후 6주령의 체중이 200g ± 20g인 SPF 등급 암컷 쥐를 사용했습니다. 발정기의 쥐는 질 도말 검사를 기반으로 선정하고 난수 방법을 사용하여 4개 그룹으로 나눴습니다. 이들은 차량군, 냉응고형 월경통 모델군(모델군), 냉응고형 월경통 모델군+서양의학군(약군), 냉응고형 월경통 모델군(뜸군)으로 나뉘며, 각 그룹에는 12마리의 랫트가 있습니다.차량 그룹: 동물을 생리식염수(0.9% 염화나트륨)로 처리했습니다.모델 그룹: 한랭응고 증후군 월경통 모델의 모델링 과정에서 중재는 수행되지 않았으며 뜸 그룹과 동일한 구속 및 고정만 수행되었습니다.의학군: 감작6일째 부터 0.9% 염화나트륨 용액에 용해된 이부프로펜을 매일 가비지로 투여했습니다. 각 쥐에게 0.06g/kg을 투여했습니다.뜸 그룹: 감작6일째 부터 Zhuang 약실을 사용한 일일 뜸 치료를 수행했습니다. 이 그룹은 7일 연속 매일 오전 8시에 한 번씩 치료를 받았습니다.모든 동물은 Guangxi International Zhuang Medical Hospital의 Experimental Animal Science Center (청결 수준)에서 보관됩니다. 쥐들은 한 우리에 4마리의 쥐가 있는 플라스틱 우리에서 먹이를 먹였습니다. 그들은 정상적으로 먹고 마셨고, 생체 리듬을 번갈아 가며 유지했으며, 실내는 건조해야 했습니다. 실내 온도는 23 ± 1 °C로 제어되었으며 습도는 60 % ± 5 %였습니다. 1. 한랭응고증후군을 동반한 월경통의 랫트 모델 확립 동결: 1-12일째에 0.3% 펜토바르비탈(30mg/kg)의 복강 내 주사로 쥐를 마취한 다음 연속 12일 동안 매일 20분 동안 얼음 위에 놓습니다. 감작: 1-12일째에 통증 유발 물질에 대한 자궁의 민감성을 향상시키기 위해 에스트라디올 벤조에이트를 쥐에게 피하로 주사합니다. 1일과 12일에, 0.8 mg / 동물을 주사하십시오; 2일에서 11일까지, 0.4 mg/animal를 주사하십시오. 통증 유도 : 12일 째, 에스트라디올 벤조 에이트 주사 후 1 시간 후에 쥐에게 복강 내 2U의 옥시토신을 주사하여 통증을 유발합니다.참고: 이 모델은 에스트라디올 벤조에이트 및 옥시토신 주입10과 결합된 전신 동결 방법을 사용하여 생성되었습니다. 1.4.1-1.4.4단계에 설명된 대로 각 동물 그룹을 치료합니다.차량 그룹의 쥐에 대해서는 1.1-1.3 단계를 수행하지 마십시오. 생리식염수(0.9% 염화나트륨)만으로 치료한다. 모델 그룹의 쥐에 대해 1.1-1.3단계를 수행합니다. 뜸 그룹과 유사한 방식으로 그룹에 속한 동물을 구속하지만 약물/치료 개입은 없습니다. 약 그룹의 쥐에 대해 1.1-1.3 단계를 수행합니다. 감작 6일 째(1.2단계)부터 이부프로펜을 0.9% 염화나트륨 용액에 녹여 매일 (0.06g/kg) 투여합니다. 뜸 그룹의 쥐에 대해 1.1-1.3 단계를 수행하십시오. 감작6일째 (1.2단계)부터 연속 7일 동안 매일 오전 8시에 한 번 Zhuang 약실(섹션 4)로 뜸 치료를 수행합니다. 2. Zhuang 의학 스레드에 대한 뜸 시뮬레이터 설정 버튼 1을 길게 누르고 있으면 설정 상태로 들어갑니다. 버튼 2(플러스) 또는 버튼 3(마이너스)을 짧게 누르면 132 코드가 나타납니다. 누를 때마다 0.5cm를 출력하도록 버튼 입력을 설정합니다. 코드 2.1이 나타날 때까지 130단계를 반복하고 점화 후 6초 이내에 장치가 자동으로 점화될 수 있습니다. 코드 131이 나타날 때까지 2.1단계를 반복하고 기기가 자동으로 뜸을 두 번 수행합니다. 속도 제어 버튼을 돌려 주파수를 2회/초로 설정합니다.참고: 버튼 번호는 보충 그림 1에 자세히 설명되어 있습니다. 3. Zhuang 의학 실의 준비 약주의 제조다양한 질병의 치료에 따라 약용 주류 구성을 선택하십시오. 이 실험에서는 유향 10g, 백단향 10g, 우디 향 10g, 복숭아 알갱이 10g, 잇꽃 10g, 당귀 10g, 팡펑 10g, 붉은 작약 10g, 수무 10g, 건조 생강 10g, 강황 10g을 사용했습니다. 이 성분을 75% 알코올 1000mL에 담그고 10일 후에 여과하여 약액을 만듭니다. 약실을 담그기: 모시실을 위에서 언급한 약액에 최소 10일 동안 담가두고(그림 2), 약실을 뜸을 위해 꺼낸 다음 나중에 사용할 수 있도록 약실을 병에 밀봉합니다. 사용할 때마다 약 21cm 길이의 약실을 빼냅니다(그림 3). 4. Zhuang 의학 실 뜸의 중재 방법 경혈 선택참고: 쥐는 0.3% 펜토바르비탈(30mg/kg)의 복강 내 주사로 마취됩니다.작은 동물 면도 기계를 사용하여 쥐의 복부 부위의 털을 청소하십시오. 실 뜸으로 월경통을 치료한 경험을 바탕으로 Shenque, Guanyuan, Zhongji, Uterine 경혈과 같은 경혈 11,12,13을 선택하십시오. 마커를 사용하여 쥐의 하복부 영역에 위의 경혈을 표시하십시오.알림: 경혈에 대해서는 그림 4 를 참조하십시오. Shen que (CV8, xiphoid process와 pubic symphysis의 상단 가장자리를 연결하는 선의 상부 2/3와 하부 1/3의 교차점); Guan yuan (CV4, Shenque 경혈 아래 25mm); Zhong ji (CV3, Guanyuan 경혈 아래 8mm); 왼쪽 자궁 경혈 (왼쪽, EX-CA1, Zhongji 경혈의 왼쪽으로 25mm 열림); 오른쪽 자궁 경혈(오른쪽, EX-CA1, Zhongji 경혈의 오른쪽으로 25mm 열림). 쥐 고치기고탄성 고무 밴드 (아크릴 판 크기 10cm × 15cm × 5cm)를 사용하여 투명 아크릴 판에 쥐를 고정하여 복부를 노출시킵니다. 고정 쥐를 Zhuang Medicine Line Moxibustion 시뮬레이터의 수술대에 놓고 포지셔닝 링을 쥐의 복부에 밀착되도록 조정한 다음 마우스의 위치를 좌우로 조정하여 표시된 경혈 하나가 포지셔닝 링의 중앙에 위치하도록 합니다(그림 5). 약선 배치적신 약사 1 개를 꺼내 약사 제어 장치에 삽입합니다. 지지 프레임의 수직 및 수평 축에 있는 나사 손잡이를 회전합니다. 쉘 바닥과 포지셔닝 링 하단 사이의 거리가 2cm가 되도록 약물 라인 제어 장치의 쉘을 위아래로 조정하고(그림 6), 그에 따라 점화 지지축과 포지셔닝 로드 샤프트를 조정합니다. 와이어 입력 단추를 클릭하여 쉘에서 0.5cm 떨어진 곳에 메디스트 와이어를 노출시킵니다(누를 때마다 와이어 끝이 0.5cm 밖으로 나오도록 설정)(그림 7). 포인트 뜸점화 버튼을 누르면 점화 장치가 자동으로 점화됩니다. 기본 타이밍은 6초입니다. 그 후, 자동 뜸은 주파수가 2회/s로 설정된 상태로 두 번 수행됩니다(그림 8)알림: 이전에 온도가 23± 1°C이고 습도가 60% ± 5%인 바람이 없는 환경에서 6초 후에 비드 화재가 발생할 수 있음을 반복적으로 테스트했습니다. 경혈의 뜸 후 투명 아크릴 프레임을 움직여 뜸이 필요한 다음 경혈이 위치 지정 원의 중앙에 위치하도록 위치를 조정합니다. 4.3.3단계와 4.4.1단계를 반복합니다. 5. 비틀림 스코어링 작업 쥐에게 옥시토신(2U)을 주입하고 빈 우리에 넣습니다. 20분 이내에 각 쥐의 비틀림 반응을 관찰합니다.참고: 차량 그룹을 제외하고 각 그룹별로 6마리의 쥐가 선택되었습니다. 비틀림 반응이 발생하면, 원발성 월경통 모델은 랫트14에서 성공적으로 확립되었다. 식염수 그룹에는 동일한 용량의 생리식염수를 주입하였다. 이 연구에서는 Schmauss15가 제안한 행동 점수가 사용되었습니다. 정상적인 탐색 행동의 경우 0점; 몸통이 한쪽으로 기울어져 있고 복부는 수축으로 인해 안쪽으로 오목한 1 점; 뒷다리 확장, 뒷발 배굴곡, 골반 회전에 따른 몸통 확장, 2점; 복부 근육 수축, 뒷다리 신전, 3점(그림 9) 트위스트 응답의 대기 시간, 트위스트 횟수 및 트위스트 점수는 모두 20분 이내에 기록되었습니다. 쥐가 몸부림치는 잠복기는 옥시토신 주사(통증 유발)부터 쥐에서 몸부림치는 반응이 처음 나타날 때까지의 시간(분)입니다.트위스트 점수 = [0 레벨 (횟수) × 0 점 + 1 레벨 (빈도) × 1 포인트 + 2 레벨 (빈도) × 2 포인트 + 3 레벨 (빈도) × 3 점]. 6. 적외선 열화상 각 그룹의 나머지 6마리의 쥐를 0.3% 펜토바르비탈 30mg/kg의 복강내 주사로 마취하여 자궁 돌출부를 노출시킵니다. 수술 후 적외선 열화상 카메라 렌즈의 시야에 쥐를 놓고 적외선 열화상 카메라를 사용하여 자궁 투영 영역의 온도를 기록합니다. 각 경혈을 3 번 측정하고 평균값을 해당 경혈의 온도로 취합니다. 열화상 소프트웨어를 사용하여 적외선 열화상을 내보냅니다(그림 10).참고: 모델링 12일 째(즉, 개입7일째 )에 각 그룹의 나머지 6마리의 쥐를 적외선 열화상 관찰을 실시했습니다. 냉응고 증후군이 있는 원발성 월경통 쥐는 자궁의 표면 돌출 온도가 감소하는 것을 경험하게 됩니다. 쥐에서 자궁의 표면 돌출 온도를 관찰하면 냉응고 증후군의 심각성을 결정할 수 있습니다. 온도가 낮을수록 냉응고 증후군이 더 심해집니다.