Medicated Thread Moxibustion Therapy van Zhuang Medicine en de toepassing ervan in een rattenmodel van het koude-stollende syndroom van primaire dysmenorroe

De dierproeven in deze studie werden beoordeeld en goedgekeurd door de Commissie Ethiek van Dierproeven van de Guangxi University of Traditional Chinese Medicine (ethisch licentienummer DW20230411-45). De procedures voor het uitvoeren van dieren volgen strikt de inhoud van de Guiding Opinions on Treating Experimental Animals (Guo Ke Fa Cai Zi [2006] No. 398) en de normen voor dierenbescherming en -gebruik van de International Society for Pain Research (IASP). OPMERKING: Vrouwelijke ratten van SPF-kwaliteit, 6 weken oud, met een lichaamsgewicht van 200 g ± 20 g, werden in dit onderzoek gebruikt. Ratten in de oestrische fase werden geselecteerd op basis van vaginale uitstrijkjes en verdeeld in vier groepen met behulp van de random number-methode. Ze zijn onderverdeeld in de voertuiggroep, de modelgroep dysmenorroe van het koude stollingstype (de modelgroep), de modelgroep dysmenorroe van het koude stollingstype + de Western Medicine Group (de geneeskundegroep), de modelgroep dysmenorroe van het koude stollingstype + de moxibustiegroep van de Zhuang Medicine-lijn (de moxibustiegroep), met 12 ratten in elke groep.Voertuiggroep: De dieren werden behandeld met fysiologische zoutoplossing (0,9% natriumchloride).Modelgroep: Tijdens het modelleringsproces van het dysmenorroe-model met koudestollingssyndroom werd geen interventie uitgevoerd en werd alleen dezelfde fixatie en fixatie uitgevoerd als de moxibustiegroep.Geneesmiddelgroep: Vanaf de 6edag van sensibilisatie werd ibuprofen opgelost in 0,9% natriumchloride-oplossing elke dag via een maagsonde toegediend. Elke rat kreeg 0,06 g/kg.Moxibustiegroep: Vanaf de 6edag van sensibilisatie werd een dagelijkse moxibustiebehandeling met Zhuang-medicijndraad uitgevoerd. Deze groep werd eenmaal daags om 8 uur ‘s ochtends behandeld gedurende 7 opeenvolgende dagen.Alle dieren worden gehouden in het Experimental Animal Science Center van het Guangxi International Zhuang Medical Hospital (schoon niveau). De ratten werden gevoed in plastic kooien met 4 ratten in één kooi. Ze aten en dronken normaal, hielden het circadiane ritme afwisselend en moesten binnenshuis droog zijn. De kamertemperatuur werd geregeld op 23 ± 1 °C en de luchtvochtigheid was 60% ± 5%. 1. Opstelling van een rattenmodel van dysmenorroe met koud stollingssyndroom Invriezen: Verdoof de ratten op dag 1-12 met een intraperitoneale injectie van 0,3% pentobarbital (30 mg/kg) en leg ze vervolgens gedurende 12 opeenvolgende dagen 20 minuten per dag op ijs. Sensibilisatie: Injecteer ratten op dag 1-12 subcutaan met oestradiolbenzoaat om de gevoeligheid van de baarmoeder voor pijnveroorzakende stoffen te vergroten. Injecteer op de1e en 12edag 0,8 mg/dier; Injecteer op de2e tot 11edag 0,4 mg/dier. Pijninductie: Op de12e dag, 1 uur na injectie van oestradiolbenzoaat, injecteert u de ratten intraperitoneaal met 2 U oxytocine, wat pijn veroorzaakt.OPMERKING: Het model is gemaakt met behulp van de bevriezingsmethode voor het hele lichaam in combinatie met injectie met estradiolbenzoaat en oxytocine10. Behandel elke diergroep zoals beschreven in de stappen 1.4.1-1.4.4.Voor de ratten in de voertuiggroep geldt dat de stappen 1.1-1.3 niet mogen worden uitgevoerd. Behandel ze alleen met fysiologische zoutoplossing (0,9% natriumchloride). Voor de ratten in de modelgroep voert u stap 1.1-1.3 uit. Houd de dieren in de groep in bedwang op een manier die vergelijkbaar is met die van de moxibustiegroep, maar zonder enige medicamenteuze interventie/behandelingsinterventie. Voor de ratten in de geneesmiddelgroep voert u stap 1.1-1.3 uit. Los vanaf de 6edag van sensibilisatie (stap 1.2) ibuprofen op in 0,9% natriumchlorideoplossing en geef het dagelijks via een maagsonde (0,06 g/kg). Voor de ratten in de moxibustiegroep voert u stap 1.1-1.3 uit. Voer vanaf de 6edag van sensibilisatie (stap 1.2) een moxibustiebehandeling uit met Zhuang-geneesmiddeldraad (sectie 4) eenmaal daags om 8 uur ‘s ochtends gedurende 7 opeenvolgende dagen. 2. Het opzetten van de moxibustiesimulator voor Zhuang-geneeskundedraden Houd knop 1 lang ingedrukt om naar de instellingsstatus te gaan. Druk kort op knop 2 (plus) of knop 3 (min) en er verschijnt een 132-code. Stel de knopinvoer in op uitvoer 0.5 cm voor elke druk. Herhaal stap 2.1 totdat code 130 verschijnt en het apparaat binnen 6 s na ontsteking automatisch kan ontbranden. Herhaal stap 2.1 totdat code 131 verschijnt en het instrument automatisch twee keer moxibustie uitvoert. Draai aan de snelheidsregelknop om de frequentie in te stellen op 2 keer/s.OPMERKING: Het knopnummer wordt gedetailleerd weergegeven in aanvullende afbeelding 1. 3. Bereiding van Zhuang-medicijndraden Bereiding van medicinale drankSelecteer configuraties van medicinale dranken op basis van de behandeling van verschillende ziekten. In dit experiment werden 10 g wierook, 10 g sandelhout, 10 g houtachtige wierook, 10 g perzikpit, 10 g saffloer, 10 g Angelica sinensis-staart, 10 g Fangfeng, 10 g rode pioenroos, 10 g Sumu, 10 g droge gember en 10 g kurkuma gebruikt. Week deze ingrediënten in 1000 ml 75% alcohol en filtreer na 10 dagen om een medicinale likeur te vormen. De medicinale draad weken: Week de rameedraad ten minste 10 dagen in de bovengenoemde medicinale drank (Figuur 2), verwijder de medicinale draad voor moxibustie en sluit de medicinale draad af in een fles voor later gebruik. Haal bij gebruik telkens een medicinale draad met een lengte van ongeveer 21 cm eruit (Figuur 3). 4. Interventiemethoden van Zhuang-moxibustie van de geneeskundedraad Acupunt selectieOPMERKING: De ratten worden verdoofd door middel van een intraperitoneale injectie van 0,3% pentobarbital (30 mg/kg).Reinig het haar in de buikstreek van ratten met behulp van een scheermachine voor kleine dieren. Op basis van de ervaring in de behandeling van dysmenorroe met draadmoxibustie, selecteert u acupunten 11,12,13 zoals Shenque, Guanyuan, Zhongji en baarmoederacupunten. Gebruik een stift om de bovenstaande acupunten op de onderbuik van de rat te markeren.OPMERKING: Raadpleeg Figuur 4 voor de acupunten. Shen que (CV8, het snijpunt van de bovenste 2/3 en onderste 1/3 van de lijn die de processus xiphoid verbindt met de bovenrand van de symphysis pubis); Guan yuan (CV4, 25 mm onder Shenque-acupunt); Zhong ji (CV3, 8 mm onder het Guanyuan-acupunt); Linker baarmoeder acupunt (links, EX-CA1, opening 25 mm naar de linkerkant van Zhongji acupunt); Acupunt rechter baarmoeder (rechts, EX-CA1, opening 25 mm aan de rechterkant van het Zhongji-acupunt). Het repareren van de rattenBevestig de ratten op een transparante acrylplaat met behulp van hoge elastische elastiekjes (acrylplaat afmeting 10 cm × 15 cm × 5 cm) om de buik bloot te leggen. Plaats de gefixeerde rat op de operatietafel van de Zhuang Medicine Line Moxibustion-simulator, pas de positioneringsring aan om aan de buik van de rat te hechten en pas de positie van de rat naar links en rechts aan zodat een gemarkeerd acupunt zich in het midden van de positioneringsring bevindt (Figuur 5). Het plaatsen van de medicinale lijnHaal een doorweekte medicijndraad eruit en steek deze in het medicijndraadcontroleapparaat. Draai de schroefknoppen op de verticale en horizontale assen van het draagframe. Stel de schaal van het bedieningsapparaat voor de medicijnlijn op en neer af zodat de afstand tussen de onderkant van de schaal en de onderkant van de positioneringsring 2 cm is (Figuur 6) en pas de ontstekingsondersteuningsas en de as van de positioneringsstang dienovereenkomstig aan. Klik op de draadinvoerknop om de medicijndraad op 0.5 cm van de schaal bloot te leggen (stel het draaduiteinde in op 0.5 cm uitgang voor elke pers) (Figuur 7). Punt moxibustieDruk op de ontstekingsknop en het ontstekingsapparaat wordt automatisch ontstoken. De standaardtiming is 6 s. Daarna wordt de automatische moxibustie twee keer uitgevoerd, met een frequentie ingesteld op 2 keer/s (Figuur 8)OPMERKING: Het is eerder herhaaldelijk getest dat bij een windstille omgeving met een temperatuur van 23 ± 1 °C en een luchtvochtigheid van 60% ± 5% na 6 s parelbrand kan ontstaan. Na de moxibustie van een acupunt, verplaats je het transparante acrylframe om de positie aan te passen zodat het volgende acupunt dat moxibustie vereist, zich in het midden van de positioneringscirkel bevindt. Herhaal de stappen 4.3.3 en 4.4.1. 5. Torsie scoren operatie Injecteer ratten met oxytocine (2 E) en plaats ze in lege kooien. Observeer de draaireactie van elke rat binnen 20 minuten.OPMERKING: Met uitzondering van de voertuiggroep werden voor elke groep 6 ratten geselecteerd. Als er een draaireactie optreedt, is het primaire dysmenorroe-model met succes vastgesteld bij ratten14. De zoutoplossinggroep werd geïnjecteerd met gelijke doses fysiologische zoutoplossing. Gedragsscores voorgesteld door Schmauss15werd in deze studie gebruikt: voor normaal exploratiegedrag, 0 punt; De romp is naar één kant gekanteld en de buik is naar binnen concaaf als gevolg van samentrekking, 1 punt; Extensie van de achterpoten, dorsaalflexie van de achterpoten, rompextensie met bekkenrotatie, 2 punten; Samentrekking van de buikspier, extensie van de achterpoten, 3 punten (Figuur 9) De latentie, het aantal wendingen en de twistscore van de twistrespons werden allemaal binnen 20 minuten geregistreerd. De latentieperiode van het kronkelen van ratten is de tijd (min) vanaf oxytocine-injectie (pijn veroorzaken) tot het eerste optreden van de kronkelende reactie bij ratten.Twist score = [0 niveau (aantal keren) × 0 punten + 1 niveau (frequentie) × 1 punt + 2 niveaus (frequentie) × 2 punten + 3 niveaus (frequentie) × 3 punten]. 6. Infrarood warmtebeeldvorming Verdoof de overige 6 ratten in elke groep door middel van een intraperitoneale injectie van 0,3% pentobarbital 30 mg/kg, waarbij het baarmoederprojectiegebied wordt blootgelegd. Plaats de rat na de operatie in het gezichtsveld van de lens van de infrarood warmtebeeldcamera en registreer de temperatuur van het baarmoederprojectiegebied met behulp van de infrarood warmtebeeldcamera. Meet elk acupunt 3 keer en neem de gemiddelde waarde als de temperatuur van dat acupunt. Exporteer infrarood warmtebeelden met behulp van warmtebeeldsoftware (Figuur 10).OPMERKING: Op de 12edag van modellering (d.w.z. de 7edag van interventie) werden de overige 6 ratten in elke groep onderworpen aan infrarood warmtebeeldobservatie. Primaire dysmenorroe-ratten met koud stollingssyndroom zullen een afname van de oppervlakteprojectietemperatuur van de baarmoeder ervaren. Het observeren van de oppervlakteprojectietemperatuur van de baarmoeder bij ratten kan de ernst van het koude stollingssyndroom bepalen. Hoe lager de temperatuur, hoe ernstiger het koudestollingssyndroom.