Thérapie médicamenteuse par moxibustion de fil de la médecine Zhuang et son application dans un modèle de rat du syndrome de congélation par le froid de la dysménorrhée primaire

Les expériences sur les animaux de cette étude ont été examinées et approuvées par le Comité d’éthique de l’expérimentation animale de l’Université de médecine traditionnelle chinoise du Guangxi (numéro de licence éthique DW20230411-45). Les procédures d’utilisation des animaux suivent strictement le contenu des Avis d’orientation sur le traitement des animaux d’expérimentation (Guo Ke Fa Cai Zi [2006] n° 398) et les normes de protection et d’utilisation des animaux de la Société internationale de recherche sur la douleur (IASP). REMARQUE : Des rats femelles de 6 semaines, âgés de 6 semaines, pesant 200 g ± 20 g, ont été utilisés dans cette étude. Les rats en phase œstrale ont été sélectionnés sur la base de frottis vaginaux et divisés en quatre groupes à l’aide de la méthode des nombres aléatoires. Ils sont divisés en deux groupes : le groupe modèle de dysménorrhée de type coagulation froide (le groupe modèle), le groupe modèle de dysménorrhée de type coagulation froide + le groupe de médecine occidentale (le groupe de médecine), le groupe modèle de dysménorrhée de type coagulation froide + le groupe de moxibustion de ligne de médecine Zhuang (le groupe de moxibustion), avec 12 rats dans chaque groupe.Groupe de véhicules : Les animaux ont été traités avec une solution saline physiologique (chlorure de sodium à 0,9 %).Groupe modèle : Au cours du processus de modélisation du modèle de dysménorrhée du syndrome de coagulation froide, aucune intervention n’a été effectuée, et seules la même contention et fixation ont été effectuées que le groupe de moxibustion.Groupe de médecine : À partir du 6ème jour de sensibilisation, l’ibuprofène dissous dans une solution de chlorure de sodium à 0,9 % a été administré par gavage tous les jours. Chaque rat a reçu 0,06 g/kg.Groupe de moxibustion : À partir du6ème jour de sensibilisation, un traitement quotidien de moxibustion avec le fil de médecine Zhuang a été effectué. Ce groupe a reçu un traitement une fois par jour à 8 h pendant 7 jours consécutifs.Tous les animaux sont gardés au Centre des sciences des animaux expérimentaux de l’hôpital médical international Zhuang du Guangxi (niveau propre). Les rats ont été nourris dans des cages en plastique avec 4 rats dans une cage. Ils mangeaient et buvaient normalement, maintenaient le rythme circadien en alternance et devaient être secs à l’intérieur. La température ambiante était de 23 ± 1 °C et l’humidité était de 60 % ± 5 %. 1. Etablissement d’un modèle de dysménorrhée avec syndrome de coagulation par le froid chez le rat Congélation : Du 1er au 12e jour, anesthésier les rats avec une injection intrapéritonéale de pentobarbital à 0,3 % (30 mg/kg), puis les placer sur de la glace pendant 20 minutes par jour pendant 12 jours consécutifs. Sensibilisation : Des jours 1 à 12, injectez par voie sous-cutanée du benzoate d’œstradiol chez des rats pour augmenter la sensibilité de l’utérus aux substances causant de la douleur. Les 1eret 12ejours, injecter 0,8 mg/animal ; Du 2au 11e jour, injecter 0,4 mg/animal. Induction de la douleur : Le 12ème jour, 1 h après l’injection de benzoate d’œstradiol, injectez aux rats par voie intrapéritonéale 2 U d’ocytocine, provoquant des douleurs.REMARQUE : Le modèle a été créé à l’aide de la méthode de congélation du corps entier combinée à l’injection de benzoate d’estradiol et d’ocytocine10. Traitez chaque groupe d’animaux comme décrit aux étapes 1.4.1 à 1.4.4.Pour les rats du groupe véhicule, n’effectuez pas les étapes 1.1-1.3. Traitez-les avec une solution saline physiologique (chlorure de sodium à 0,9 %) uniquement. Pour les rats du groupe modèle, effectuez les étapes 1.1 à 1.3. Retenir les animaux du groupe d’une manière similaire à celle du groupe de moxibustion, mais sans aucune intervention médicamenteuse/thérapeutique. Pour les rats du groupe médicament, effectuez les étapes 1.1 à 1.3. À partir du 6ème jour de sensibilisation (étape 1.2), dissoudre l’ibuprofène dans une solution de chlorure de sodium à 0,9 % et l’administrer par gavage quotidiennement (0,06 g/kg). Pour les rats du groupe de moxibustion, effectuez les étapes 1.1 à 1.3. À partir du 6èmejour de sensibilisation (étape 1.2), effectuez un traitement de moxibustion avec du fil médicinal Zhuang (section 4) une fois par jour à 8 heures du matin pendant 7 jours consécutifs. 2. Configuration du simulateur de moxibustion pour les fils de médecine Zhuang Appuyez longuement sur le bouton 1 et maintenez-le enfoncé pour entrer dans l’état de réglage. Appuyez brièvement sur le bouton 2 (Plus) ou le bouton 3 (Minus) et un code 132 apparaîtra. Réglez l’entrée du bouton sur une sortie de 0,5 cm à chaque pression. Répétez l’étape 2.1 jusqu’à ce que le code 130 apparaisse et que l’appareil puisse s’allumer automatiquement dans les 6 s suivant l’allumage. Répétez l’étape 2.1 jusqu’à ce que le code 131 apparaisse et que l’instrument effectue automatiquement la moxibustion deux fois. Tournez le bouton de contrôle de la vitesse pour régler la fréquence sur 2 fois/s.REMARQUE : Le numéro du bouton est détaillé dans la Figure supplémentaire 1. 3. Préparation des fils de médecine Zhuang Préparation de la liqueur médicinaleSélectionnez les configurations de liqueur médicinale en fonction du traitement des différentes maladies. Dans cette expérience, 10 g d’encens, 10 g de bois de santal, 10 g d’encens ligneux, 10 g de noyau de pêche, 10 g de carthame, 10 g de queue d’Angelica sinensis, 10 g de Fangfeng, 10 g de pivoine rouge, 10 g de Sumu, 10 g de gingembre sec et 10 g de curcuma ont été utilisés. Faites tremper ces ingrédients dans 1000 ml d’alcool à 75% et filtrez après 10 jours pour former une liqueur médicinale. Trempage du fil médicinal : Faites tremper le fil de ramie dans la liqueur médicinale mentionnée ci-dessus pendant au moins 10 jours (Figure 2), retirez le fil médicinal pour la moxibustion et scellez le fil médicinal dans une bouteille pour une utilisation ultérieure. Retirez un fil médicinal d’une longueur d’environ 21 cm à chaque fois que vous l’utilisez (Figure 3). 4. Méthodes d’intervention de la moxibustion de fil de médecine Zhuang Sélection des points d’acupunctureREMARQUE : Les rats sont anesthésiés par injection intrapéritonéale de pentobarbital à 0,3 % (30 mg/kg).Nettoyez les poils de la région abdominale des rats à l’aide d’une machine à raser pour petits animaux. Sur la base de l’expérience dans le traitement de la dysménorrhée avec la moxibustion filiforme, sélectionnez les points d’acupuncture11, 12, 13 tels que Shenque, Guanyuan, Zhongji et les points d’acupuncture utérins. Utilisez un marqueur pour marquer les points d’acupuncture ci-dessus sur la région abdominale inférieure du rat.REMARQUE : Reportez-vous à la figure 4 pour les points d’acupuncture. Shen que (CV8, l’intersection des 2/3 supérieur et inférieur 1/3 de la ligne reliant l’apophyse xiphoïde et le bord supérieur de la symphyse pubienne) ; Guan yuan (CV4, 25 mm sous l’acupoint de Shenque) ; Zhong ji (CV3, 8 mm en dessous du point d’acupuncture de Guanyuan) ; Point d’acupuncture utérin gauche (à gauche, EX-CA1, ouverture de 25 mm vers le côté gauche de l’acupoint Zhongji) ; Point d’acupuncture utérin droit (à droite, EX-CA1, ouverture de 25 mm sur le côté droit du point d’acupuncture Zhongji). Réparer les ratsFixez les rats sur une planche acrylique transparente à l’aide d’élastiques (planche acrylique 10 cm × 15 cm × 5 cm) pour exposer l’abdomen. Placez le rat fixe sur la table d’opération du simulateur de moxibustion de ligne de médecine Zhuang, ajustez l’anneau de positionnement pour qu’il adhère à l’abdomen du rat et ajustez la position du rat à gauche et à droite de sorte qu’un point d’acupuncture marqué soit situé au centre de l’anneau de positionnement (Figure 5). Mise en place de la ligne médicamenteuseRetirez un fil de médicament imbibé et insérez-le dans le dispositif de contrôle du fil de médicament. Faites pivoter les boutons à vis sur les axes verticaux et horizontaux du cadre de support. Ajustez la coque du dispositif de contrôle de la conduite de drogue de haut en bas de sorte que la distance entre le bas de la coque et le bas de la bague de positionnement soit de 2 cm (Figure 6), et ajustez l’arbre du support d’allumage et l’arbre de la tige de positionnement en conséquence. Cliquez sur le bouton d’entrée du fil pour exposer le fil de médecine à 0,5 cm de la coque (réglez l’extrémité du fil sur 0,5 cm de sortie à chaque pression) (Figure 7). Moxibustion ponctuelleAppuyez sur le bouton d’allumage et le dispositif d’allumage s’allumera automatiquement. Le chronométrage par défaut est de 6 s. Après cela, la moxibustion automatique sera effectuée deux fois, avec une fréquence réglée à 2 fois/s (Figure 8)REMARQUE : Il a déjà été testé à plusieurs reprises que dans un environnement sans vent avec une température de 23 ± 1 °C et une humidité de 60% ± 5%, un feu de billes peut se former après 6 s. Après la moxibustion d’un point d’acupuncture, déplacez le cadre en acrylique transparent pour ajuster sa position afin que le prochain point d’acupuncture nécessitant une moxibustion soit situé au centre du cercle de positionnement. Répétez les étapes 4.3.3 et 4.4.1. 5. Opération d’enrayage de torsion Injectez de l’ocytocine (2 U) aux rats et placez-les dans des cages vides. Observez la réaction de torsion de chaque rat dans les 20 minutes.REMARQUE : À l’exception du groupe de véhicules, 6 rats ont été sélectionnés pour chaque groupe. Si une réaction de torsion se produit, le modèle primaire de dysménorrhée a été établi avec succès chez le rat14. Le groupe salin a reçu une injection de doses égales de solution saline physiologique. Le scoring comportemental proposé par Schmauss15a été utilisé dans cette étude : pour un comportement d’exploration normal, 0 point ; Le torse est incliné d’un côté et l’abdomen est concave vers l’intérieur en raison de la contraction, 1 point ; Extension des membres postérieurs, dorsiflexion des pattes arrière, extension du tronc avec rotation pelvienne, 2 points ; Contraction du muscle abdominal, extension des membres postérieurs, 3 points (Figure 9) La latence, le nombre de torsions et le score de torsion de la réponse à la torsion ont tous été enregistrés en 20 minutes. La période de latence de la torsion du rat est le temps (min) entre l’injection d’ocytocine (provoquant la douleur) et la première apparition de la réaction de torsion chez le rat.Score de torsion = [0 niveau (nombre de fois) × 0 point + 1 niveau (fréquence) × 1 point + 2 niveaux (fréquence) × 2 points + 3 niveaux (fréquence) × 3 points]. 6. Imagerie thermique infrarouge Anesthésier les 6 rats restants de chaque groupe par injection intrapéritonéale de pentobarbital à 0,3 % 30 mg/kg, en exposant la zone de projection utérine. Après l’opération, placez le rat dans le champ de vision de la lentille de l’imageur thermique infrarouge et enregistrez la température de la zone de projection utérine à l’aide de l’imageur thermique infrarouge. Mesurez chaque point d’acupuncture 3 fois et prenez la valeur moyenne comme la température de ce point d’acupuncture. Exportez des images thermiques infrarouges à l’aide d’un logiciel d’imagerie thermique (Figure 10).REMARQUE : Le 12e jour de modélisation (c’est-à-dire le 7e jour d’intervention), les 6 rats restants de chaque groupe ont été soumis à une observation par imagerie thermique infrarouge. Les rats dysménorrhées primaires atteints d’un syndrome de coagulation froide connaîtront une diminution de la température de projection de surface de l’utérus. L’observation de la température de projection de surface de l’utérus chez le rat peut déterminer la gravité du syndrome de coagulation par le froid. Plus la température est basse, plus le syndrome de coagulation par le froid est grave.