Summary

Модель боли в спине мыши, индуцированная активатором плазминогена урокиназного типа

Published: September 01, 2023
doi:

Summary

Здесь представлены методы простой и быстрой индукции модели боли в спине у мышей с использованием интрасвязочной инъекции активатора плазминогена в моче.

Abstract

Модель персистирующей боли в пояснице может быть индуцирована у мышей с помощью простой методики, описанной в этой статье. Здесь представлены пошаговые методы простой и быстрой индукции модели персистирующей боли в спине у мышей с использованием инъекции активатора плазминогена урокиназного типа (урокиназы), сериновой протеазы, присутствующей у людей и других животных. Методика индукции персистирующей боли в пояснице у мышей включает простую инъекцию урокиназы вдоль области прикрепления связок поясничного отдела позвоночника. Воспалительный агент урокиназа активирует плазминоген в плазмин. Как правило, модель может быть индуцирована в течение 10 минут, и гиперчувствительность сохраняется не менее 8 недель.

Гиперчувствительность, нарушение походки и другие стандартные тревожные и депрессивные показатели могут быть проверены в персистирующей модели. Боль в спине является наиболее распространенным типом боли. Чтобы повысить осведомленность о боли в спине, Международная ассоциация по изучению боли (IASP) назвала 2021 год «Глобальным годом боли в спине», а 2022 год — «Глобальным годом воплощения знаний о боли в практику». Одним из ограничений терапевтического прогресса в области лечения боли является отсутствие подходящих моделей для тестирования постоянной и хронической боли. Особенности этой модели подходят для тестирования потенциальных терапевтических средств, направленных на уменьшение боли в спине и ее вспомогательных характеристик, что способствовало тому, что IASP назвала 2022 год Всемирным годом воплощения знаний о боли в практику.

Introduction

Боль в пояснице является одной из наиболее распространенных причин инвалидности, от которой страдает каждый пятыйчеловек во всем мире1. Несмотря на эти усилия, лишь немногие надежные модели боли в спине на животных широко используются в исследованиях боли на животных, особенно на мышах. Предыдущие модели использовали почти исключительно крыс для индукции хронической боли в спине (ХБП), например, вызванной инъекцией активатора плазминогена в моче (uPA) в поясничный фасеточный сустав 2,3, инъекцией фактора роста нервов (NGF) в мускулатуру туловища4 или йодоацетата натрия (MIA)5 или интерлейкина-1бета6 инъекция во внутрипозвоночный диск. Конечно, крысы предпочтительны для этих моделей в основном из-за их большего размера и легкости доступа для инъекций воспалительных агентов.

Чтобы внести ясность, мышиные модели боли в спине действительно существуют, такие как SPARC-нулевая мышиная модель дегенерации межпозвоночных дисков, используемая в течение многих лет7, но они более дорогостоящие и трудоемкие для создания, чем модели, основанные на инъекциях. Недавнее исследование на мышах установило модель боли в пояснице путем сочетания инъекций NGF в мышцы нижней части спины с вертикальнымхроническим стрессом. В следующем протоколе мы адаптировали uPA-индуцированную модель CBP на крысах для мышей2. Гиперчувствительность устанавливается в течение 1 недели и сохраняется до 6-8 недель. Кроме того, мы установили, что у мышей развивается поведение, похожее на тревогу и депрессию. Учитывая распространенность боли в спине и более распространенное использование мышей в молекулярных исследованиях боли, эта устойчивая модель легко устанавливается для использования в разработке новых стратегий лечения боли в спине.

Protocol

Все описанные процедуры с животными соответствуют Руководству NIH по уходу за лабораторными животными и их использованию. Исследования были одобрены местным Комитетом по институциональному уходу и использованию (IACUC #23-201364-HSC) Центра медицинских наук Университета Нью-Мексико. Все иссле?…

Representative Results

Поведенческое тестирование, связанное с ноцицептивами, и анализ данныхВызванные мерыГиперчувствительность на подушечке стопы развивается в течение суток после инъекции урокиназы. В течение 1 недели порог отмены значительно снижается и сохраняется до эвтаназии…

Discussion

Эту модель хронической боли в спине легко вызвать, а гиперчувствительность, установленная в течение 1 недели, может длиться до (а возможно, и дольше) 8 недель. Это позволяет точно изучать состояние хронической боли в отличие от других острых моделей, которые длятся всего неделю или две. В ?…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Грантовое финансирование было предоставлено NIH HEAL UG3 NS123958. Объекты жилищного фонда были проверены и аккредитованы AAALAC. Животные были размещены в жилом помещении Центра ресурсов животных (ARC), обслуживаемом сотрудниками лаборатории и сотрудниками Отдела лабораторных и животноводческих ресурсов (DLAR). Процедуры поведенческого тестирования являются стандартными методами в этой области, одобренными Американским обществом боли и Международной ассоциацией по изучению боли. Метод эвтаназии соответствует рекомендациям Группы по эвтаназии Американской ветеринарной медицинской ассоциации.

Materials

Animals and Consumables
70% ethanol Local Source
BALB/c mice Envigo 20-25 g
Cotton balls Fisher Scientific 19-090-702
Cotton-tipped applicators Fisher Scientific 19-062-616
Isoflurane inhalant anesthetic MedVet RXISO-250
Labeling tape Fisher Scientific NGFP7002
Nitrile exam gloves Fisher Scientific
Oxygen tank Local Source
Surgical drape, Steri-Drape Utility Sheet, Absorbent Prevention VWR 76246-788 cut into 15 x 15 cm pieces
Tygon tubing with 3 mm inner diameter Grainger 22XH87
Equipment
#11 carbon steel scalpel blades VWR 21909-612
Anesthesia induction chamber  Summit Medical Equipment Company AS-01-0530-LG
Autoclave Local Unit
Biology Dumont #5 forceps Fine Science Tools 11252-30
Glass bead sterilizer Germinator 500 VWR 102095-946
IITC Life Sciences Series 8 Model PE34 Hot/Cold Plate Analgesia Meter IITC PE34
Integra Miltex cotton & dressing pliers  Safco Dental Supply 66-317
OPTIKA CL31 double arm LED illuminator  New York Microscope Company OPCL-31
Plantar Test System with InfraRed Emitter, i. e. Hargreaves Apparatus Ugo Basile 37370-001 and 37370-002
Scalpel Handle No. 3 VWR 25607-947
Small animal heating pad  Valley Vet Supply 47375
Student Vannas spring scissors, straight blade  Fine Science Tools 91500-09
Table top animal research portable anesthesia workstation “PAM” Patterson Scientific AS-01-0007
Von Frey Filaments Ugo Basile 37450-275

Referencias

  1. O’Sullivan, P. B., et al. Back to basics: 10 facts every person should know about back pain. British Journal of Sports Medicine. 54 (12), 698-699 (2020).
  2. Nauta, H. J., McIlwrath, S. L., Westlund, K. N. Punctate midline myelotomy reduces pain responses in a rat model of lumbar spine pain: evidence that the postsynaptic dorsal column pathway conveys pain from the axial spine. Cureus. 10 (3), 2371 (2018).
  3. Shuang, F., et al. Establishment of a rat model of lumbar facet joint osteoarthritis using intraarticular injection of urinary plasminogen activator. Scientific Reports. 5 (1), 9828 (2015).
  4. Reed, N. R., et al. Somatosensory behavioral alterations in a NGF-induced persistent low back pain model. Behavioural Brain Research. 418, 113617 (2022).
  5. Suh, H. R., Cho, H. -. Y., Han, H. C. Development of a novel model of intervertebral disc degeneration by the intradiscal application of monosodium iodoacetate (MIA) in rat. The Spine Journal. 22 (1), 183-192 (2022).
  6. Kim, H., Hong, J. Y., Lee, J., Jeon, W. -. J., Ha, I. -. H. IL-1β promotes disc degeneration and inflammation through direct injection of intervertebral disc in a rat lumbar disc herniation model. The Spine Journal. 21 (6), 1031-1041 (2021).
  7. Millecamps, M., Tajerian, M., Sage, E. H., Stone, L. S. Behavioral signs of chronic back pain in the SPARC-null mouse. Spine. 36 (2), 95-102 (2011).
  8. La Porta, C., Tappe-Theodor, A. Differential impact of psychological and psychophysical stress on low back pain in mice. Pain. 161 (7), 1442-1458 (2020).
  9. Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
  10. Takao, K., Miyakawa, T. Light/dark transition test for mice. Journal of Visualized Experiments JoVE. (1), e104 (2006).
  11. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284 (2017).
  12. David, D. J., et al. Neurogenesis-dependent and -independent effects of fluoxetine in an animal model of anxiety/depression. Neuron. 62 (4), 479-493 (2009).
  13. Yalcin, I., et al. A time-dependent history of mood disorders in a murine model of neuropathic pain. Biological Psychiatry. 70 (10), 946-953 (2011).
  14. Madathil, S. K., et al. Astrocyte-specific overexpression of insulin-like growth factor-1 protects hippocampal neurons and reduces behavioral deficits following traumatic brain injury in mice. PloS One. 8 (6), e67204 (2013).
  15. Sugimoto, H., Kawakami, K. Low-cost protocol of footprint analysis and hanging box test for mice applied the chronic restraint stress. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (143), e59027 (2019).
  16. Hassan, S., et al. Identifying chronic low back pain phenotypic domains and characteristics accounting for individual variation: a systematic review. Pain. , (2023).

Play Video

Citar este artículo
Montera, M. A., Goins, A. E., Alles, S. R. A., Westlund, K. N. Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model. J. Vis. Exp. (199), e63997, doi:10.3791/63997 (2023).

View Video