Summary

Fabricación de dispositivos emparejados de índice refractivo para microfluidos biomédica

Published: September 10, 2018
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Summary

Este protocolo describe la fabricación de dispositivos microfluídicos de MY133-V2000 para eliminar los artefactos que se presentan a menudo en microcanales debido a los índices de refracción une mal entre estructuras de microcanales y una solución acuosa. Este protocolo utiliza un sostenedor de acrílico para comprimir el dispositivo encapsulado, mejorar la adherencia tanto química como mecánicamente.

Abstract

El uso de dispositivos microfluídicos ha surgido como una herramienta definitoria para aplicaciones biomédicas. Cuando se combina con técnicas de microscopía moderna, estos dispositivos pueden implementarse como parte de una plataforma robusta capaz de hacer mediciones simultáneas de complementarias. El principal reto creado por la combinación de estas dos técnicas es el desequilibrio en el índice de refracción entre los materiales tradicionalmente utilizados para hacer que los dispositivos de microfluidos y las soluciones acuosas en biomedicina. Este desajuste puede crear artefactos ópticos cerca de los bordes del canal o dispositivo. Una solución es reducir el índice de refracción del material utilizado para fabricar el dispositivo mediante el uso de un polímero fluorado como MY133-V2000 cuyo índice de refracción es similar a la del agua (n = 1.33). Aquí, se demuestra la construcción de un dispositivo de microfluidos de MY133-V2000 mediante técnicas de litografía blanda, utilizando plasma de O2 en conjunto con un sostenedor de acrílico para aumentar la adherencia entre el dispositivo de MY133-V2000 fabricado y el sustrato de polidimetilsiloxano (PDMS). El dispositivo entonces es probado por lo lleno de medios de cultivo celular de 24 h demostrar la capacidad del dispositivo para mantener condiciones de cultivo de células en el transcurso de un experimento típico de proyección de imagen incubando. Por último, la microscopia fase cuantitativa (QPM) se utiliza para medir la distribución de masa dentro de las células adherentes vivo en la MCP. Así, la mayor precisión, de fabricación del dispositivo de un polímero de bajo índice de refracción como MY133-V2000 sustituyen a materiales tradicionales litografía blanda como PDMS, está demostrada. En general, este enfoque para la fabricación de dispositivos microfluídicos puede integrarse fácilmente en flujos de trabajo existentes de litografía blanda para reducir artefactos ópticos y aumentar la precisión de la medida.

Introduction

El desarrollo de la tecnología de microfluidos ha permitido una amplia gama de nuevas técnicas biomédicas que aprovechan la única física de flujos de escala microscópica1,2. Esto incluye las técnicas diagnósticas construidas sobre plataformas de microfluidos que cuantifican biomarcadores clínicamente relevantes, incluyendo célula rigidez3, marcadores de superficie4y crecimiento5. Mediante la manipulación de las células, dispositivos microfluídicos también pueden utilizarse para medir la heterogeneidad de biomarcadores, por ejemplo como indicador de la malignidad6. La capacidad de combinar aplicaciones de microfluidos con microscopía ha aumentado aún más la utilidad de estas plataformas permitiendo dispositivos que miden los múltiples biomarcadores simultáneamente7.

QPM es una técnica de microscopía que mide el desplazamiento de fase como la luz pasa a través e interactúa con la materia dentro de las muestras transparentes. La masa de células individuales puede calcularse medidas de QPM, usando la conocida relación entre el índice de refracción y la densidad de biomasa8,9. Trabajo previo ha demostrado que el QPM es capaz de medir parámetros clínicamente relevantes como célula crecimiento10,11 y célula propiedades mecánicas mediante trastorno fuerza12. Cuando se combina con la microfluídica, QPM se puede potencialmente utilizar para medir el comportamiento de la célula en un ambiente altamente controlado en vitro. Uno de los principales retos de combinación de QPM con la microfluídica es el alto índice de refracción de los polímeros más utilizados para construir microfluídicos canales via litografía blanda13.

Un importante reto frente a la combinación de la microfluídica con diversas técnicas de microscopía es el desajuste entre el índice de refracción del material necesario en relación con el índice de refracción de agua14,15. Un método para tratar esto es mediante el uso de un polímero de bajo índice de refracción como CYTOP16 o V2000 MY13313. Este último es un fluorados ultravioleta (UV)-polímero de acrilato curado que tiene un índice de refracción similar al agua (n = 1.33) y que es compatible con técnicas de litografía blanda, lo que permite una integración suave en microfluidos establecido muchos flujos de fabricación del dispositivo. Esto hace no sólo conveniente para la fabricación de dispositivos microfluídicos MY133-V2000, pero también le permite combinarse fácilmente con QPM y otros enfoques de la microscopia, para medir el comportamiento de la célula en la Colonia y en una escala unicelular. MY133-V2000 elimina artefactos debido a fase desenvolver produciendo poco, si cualquiera, cambio de fase como la luz pasa a través de la interfaz agua-MY133.

Aunque eliminar el desequilibrio en el índice de refracción, uno de los desafíos principales asociado a los dispositivos fabricados con polímeros fluorados, como MY133-V2000, es la baja adherencia a otros materiales como el vidrio o PDMS. El presente trabajo muestra la fabricación de un dispositivo de microfluidos MY133 V2000 usando litografía blanda. Con O2 de plasma para el tratamiento de la superficie del canal y el PDMS sustrato combinado con un soporte de acrílico fabricados costumbre asegura que el dispositivo se adhiere al sustrato, creando un canal cerrado. Este dispositivo es adecuado para el cultivo celular y QPM para medir la masa de células en el canal, que tiene aplicaciones importantes para medir el crecimiento de células vivas y el transporte intracelular de la biomasa celular, los que tienen relevancia clínica en el diagnóstico descubrimiento de la medicina y de la droga.

Protocol

1. fabricación de la negativa de polidimetilsiloxano Preparación de polidimetilsiloxano Medida 18 g de elastómero de silicona PDMS y 1,8 g de reactivo endurecedor. Verter el reactivo endurecedor en un bote de medición con el elastómero. Mezclar el elastómero y el reactivo endurecedor vigorosamente por 1 minuto y poner la mezcla en una cámara de vacío durante 30 minutos. Retire el PDMS del vacío, vierta 15 g sobre el negativo con un cortador de galletas …

Representative Results

Este protocolo describe la fabricación de MY133-V2000, un polímero fluorado con un bajo índice de refracción la del agua que. Una característica clave de este protocolo es cómo superar la falta de adherencia que es característica de los polímeros fluorados mediante plasma de oxígeno y por fabricar el dispositivo dentro de un sostenedor de acrílico para proporcionar la fuerza extra mecánica requerida para sellar el canal contra el sustrato PDMS (figura 1</st…

Discussion

MY133-V2000 puede utilizarse como alternativa a los materiales de fabricación tradicional litografía blanda como PDMS. Trabajo previo ha demostrado que los materiales con un alto índice de refracción, como PDMS, introducen artefactos importantes cerca de las paredes del canal debido a los índices de refracción une mal entre el material de fabricación y la solución acuosa dentro del canal 13. MY133-V2000 permite emparejar el índice de refracción del dispositivo de microfluidos para las so…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue financiado por la Universidad de Utah, el Vicerrectorado de investigación, así como por los fondos junto con grant CA042014 P30 otorgado al Instituto de cáncer Huntsman y CRR al programa en el Instituto de cáncer Huntsman.

Materials

MY133-V2000 MY Polymers MY133-V2000
Sylgard 184 Ellsworth Adhesives 184 SIL ELAST KIT 0.5KG
Fisher Premium microscope slides Fisher Scientific 12-544-4
.118"(3.0mm) x 12" x 12" Acrylic Sheet United States Plastic Corp 44290
.060"(1.5mm) x 12" x 12" Acrylic Sheet United States Plastic Corp 44200
SCIGRIP 3 Very Fast Set Acrylic Cement United States Plastic Corp 45735
Standard Aluminum Foil (.6 mm thick) VWR 89107-726
Kim Wipes Fisher Scientific 06-666
Insta-Cure+ Super Glue Bob Smith Industries BSI-109
1/8" PVC tubing McMaster Carr 5231K55
McCormick Food Coloring Target 13353207
X-Acto #1 Precision Knife X-Acto X3201
X-Acto #18 Heavyweight wood chiseling blade X-Acto X218
VWR Razor Blades VWR 55411-055
Surface Treated Cell Culture Dishes Fisher Scientific FBO12922
Fibronectin Human Plasma Sigma-Aldritch F0895-1MG
Trypsin-EDTA 10x Fisher Scientific 15-400-054
Corning Dulbecco's Phosphate Buffered Saline Fisher Scientific MT21030CM
Gibco Penicillin-Streptomycin Fisher Scientific 15-140-148
HyClone Nonessential Amino Acids 100x Fisher Scientific SH3023801
Fetal Bovine Serum Omega Scientific FB-12
Corning DMEM with L-glutamine and glucose Fisher Scientific MT10013CV
Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane Sigma-Aldritch 448931 Reacts violently with water
Ethanol, 200 proof Decon Labs Fisher Scientific 04-355-223
Acetone Fisher Scientific A18P-4
Bel-Art 42025 Plastic Dessicator Cole-Parmer EW-06514-30
Epilog Fusion Laser Cutter, 120 W Epilog Laser Epilog Fusion M2 32 Laser
Isotemp Stirring Hotplate Fisher Scientific SP88850200
Ateco 14111 1.5 inch stainless steel cutter Ateco 14111
Pyrex Glass Cell Culture Dish Fisher Scientific 08-747B
Radio Frequency Plasma Cleaner Harrick Plasma PDC-32G Used with Oxygen gas
Black Hole Laboratories Digivac Black Hole Laboratories Model 215
Intelli-Ray Ultraviolet Oven Uvitron UVO338
Compact Spin Coater MTI Corporation VTC-100A
Fisher Brand Isotemp Oven Fisher Scientific 15-103-0510 Forced Air Convection
Gilson Positive Displacement Pipette P1000 Fisher Scientific FD10006G
HeraCell VIOS 160i Fisher Scientific 13 998 212PM

Referencias

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Citar este artículo
Polanco, E. R., Western, N., Zangle, T. A. Fabrication of Refractive-index-matched Devices for Biomedical Microfluidics. J. Vis. Exp. (139), e58296, doi:10.3791/58296 (2018).

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