ניהול מלאי טסיות בהתבסס על הקרנת microparticle בתוכן תרכיזים טסיות הוא יוזמה חדשה של שיפור איכות ב בנקי דם בבית החולים. המטרה היא להבדיל מופעל מ שלא הופעל טסיות כדי למטב את השימוש של טסיות דם. מתן טסיות שלא הופעל לחולים המטולוגיה-אונקולוגיה עשוי להפחית את הסיכון גבוהה שלהם להיות עקשן.
ניהול מלאי טסיות בהתבסס על הקרנת microparticle בתוכן תרכיזים טסיות הוא יוזמה חדשה של שיפור איכות עבור בנקי דם בבית החולים. מספר גדול של תאים מחוץ microparticles (MP) כאשר הם לחוצים מרכיבי דם ודם עשוי להכיל הסלולר קטעים מתוך מגוון של תאים, בעיקר של טסיות מופעל. בעת ביצוע תפקידיהם תאים חיסוניים מולדת ואת השחקנים המרכזיים קרישה ו hemostasis, טסיות לשנות צורה וצור microparticles. עם פיזור אור דינאמי (DLS)-המבוסס על זיהוי microparticle, ניתן להבדיל מופעל (microparticle גבוהה) שלא הופעל (נמוך microparticle) טסיות ב עירויי ולמטב את השימוש במוצר זה דם נדיר. מחקרים קודמים עולה כי מתן טסיות שלא הופעל לשימוש מניעתי בחולים המטולוגיה-אונקולוגיה יכול להפחית את הסיכון שלהם להיות עקשן, לשפר את הטיפול בחולה. המטרה של שיטת הקרנה היא להבדיל בין שגרתי הפעלתם טסיות שלא הופעל. השיטה המתוארת כאן מתאר את הפעולות שיש לבצע עבור ניהול מלאי שגרתית טסיות בבנק הדם החולים: קבלת מדגם של עירוי, loading הדגימה נימי למדידה DLS, ביצוע של DLS בדוק זהה microparticles, ואת באמצעות התוכן microparticle דיווח לזיהוי טסיות מופעל.
האינטרס microparticles יש נסובה בעיקר סביב מעורבותם בתהליכים תא לתא תקשורת, ביולוגיים. 1 , 2 , 3 לאחרונה, microparticles יש גם להתעניינות כמו פוטנציאליים סמנים אבחון מוקדם של מחלות אוטואימוניות, לב וכלי דם. 4 , 5 Microparticles, הידוע גם בשם חוץ-תאית שלפוחית או exosomes, נרחב נחקרו על ידי cytometry זרימה. למרבה הצער, למרות המאמצים לתקנן את הפרוטוקולים cytometry זרימה קונבנציונלי יש הסכמה כללית על פרוטוקול אופטימלית. להשתמש. 6 , 7 , 8 , 9 , 10
למרות cytometry זרימה קונבנציונאלי ניתן לאפיין ספציפי subpopulations MP,11 יש כמה דיווח מגבלות. 11 , 12 , 13 , 14 חלק מההגבלות הללו יש טופלו על-ידי שימוש גבוה יותר כוח לייזרים וגלאים מה שנקרא “חלקיקים קטנים אפשרות”,15,16 , כמו גם זיהוי-קדימה 15 ° – 25 ° זווית פיזור ושינית נדן לחץ . 17 , 18 . בכל זאת, שיטה מהירה, קלה לשימוש הקרנה כי יכול להיות בשילוב עם שיטות מתוחכמות אלו עדיין יש צורך לנצל microparticles כסמני אבחון מוקדם. רמות גבוהות של microparticles לזיהוי כשליש תורמים דם נורמלי19 , עשוי להצביע על תנאים תת-קליני. כתוצאה מכך, רמות microparticle גבוהות במוצרי דם שנתרמו ייתכן תואם נמענים פגיע. 20
כאשר מתן עירויי טסיות, יש סיכון של אי-החיסון refractoriness – מצב שבו גוף המטופל דוחה עירויי ברציפות ואת אינו מאפשר ניכר של טסיות הדם לזרום. 21 , 22 refractoriness Non-החיסון יכול לגרום עירויי מבוזבז, נשאר לסיבוכים בריאותיים עבור חולים, ובית החולים המורחבת. 23 עירויי טסיות המכיל מספר גבוה של microparticles יכול להיות גורם תורם לפיתוח של הלא-החיסון refractoriness בחולים פגיע המטולוגיה-אונקולוגיה. 20 אפשרי לנהל את המלאי טסיות לפי ההרכב של עירויי טסיות על ידי הקרנה של microparticles ובכך לצמצם את הסיכון עבור חולים פגיעים. עם זאת, רוב בדיקות microparticle דורשים בידוד של microparticles מ-5,טסיות דם12 או אחרת הם העבודה מאוד אינטנסיבית24,25 , ולכן לא ניתן ליישם באופן שגרתי בבית החולים בנקי דם.
בטכניקה המתוארת כאן משתמש פיזור אור דינאמי (DLS) – הידועה גם בשם ספקטרוסקופיה המתאם פוטון או פיזור אור ומעין אלסטי. במשך עשורים, פיזור אור דינאמי נרחב שימש בתעשייה הפרמצבטית לאפיון התרופה liposomal ניסוחים או אמולסיות איפה גודל החלקיקים בטווח תת מיקרון. 26 , 27 . אולם, כלים שפותחו עבור יישומים אלה לא ממוטבים למוצרים דם מסך. מערכת חדשה של DLS פותחה כדי להתגבר על מגבלות טכניות ולהפוך אור דינאמי פיזור שימושיים להקרנה של עירויי טסיות. 28
פיזור אור דינאמי מדידות מבוצעות על ידי מאיר החלקיקים על תנאי עם אור לייזר וניתוח וריאציית זמן של עוצמת האור מפוזר אשר היא תוצאה של חלקיקים נעים ההשעיה. עוד יותר, שיטה זו משתמשת היחס ההפוך בין חלקיקים מהירות וגודל – חלקיקים קטנים לנוע מהר, חלקיקים גדולים זזים לאט – לספק מידע על הפצות גודל ועל יחסי ריכוזים של הרכיבים הדגימה. באמצעות DLS, microparticle אומר התוכן ולא רדיוס של הרכיב microparticle ניתן לכמת. התוכן של microparticles את המוצר דם ניתנת % MP מבוסס באזור היסטוגרמה נמדדו חלקיקים רדיוס של 50-550 ננומטר. בעוד חלקיקים עם רדיוס מתחת 50 ננומטר זוהה על ידי DLS, שדווחו על-ידי המערכת DLS, אינם כלולים ב- % MP. במקום מבודד microparticles של טסיות הדם, הטרוגניות של עירויי טסיות נקבע בהתבסס על התוכן היחסי של microparticles ושל טסיות הדם במדגם. למעשה, היחס שבין הפסגות טסיות ו microparticle יכול לשמש כדי לחשב את הריכוז MP מוחלט מתי ספירת טסיות ידוע. 19
המערכת DLS מספקת אנשי מקצוע בתחום הבריאות עם כמותיים אודות microparticles נמצאו דגימות נגזר האנושי דם או מוצרי דם. היתרון העיקרי של הטכניקה DLS שתואר על טכניקות חלופיות כגון cytometry זרימה, מיקרוסקופ אלקטרונים, ננו-חלקיק29 מעקב אחר ניתוח30 או tunable הדופק resistive חישה31 הוא הכנת הדוגמא: aliquots של טסיות תרכיזים ניתן למדוד ישירות ללא הצורך לבודד MP טסיות הדם, לדוגמה דילול או שינויים אחרים. 9 , 17 . בנוסף, DLS היא שיטה גודל מוחלט ו אינם סובלים חוסר כיול חרוזים עם מקדם שבירה המתאים. 14 , 32
מתאם בין טסיות הפעלה ותוכן MP שהוצג בעבר על ידי מיקרוסקופ33,20 , שניתן להסיק מן העלייה MP בתוכן מצבים פתולוגיים15,34, 35 , 36 ובתנאים במבחנה ידוע כדי להפעיל את טסיות הדם. 19 , 37 , 38 . עם זאת, בהמשך נדרשים מחקרים כדי להבין באופן מלא את הקשר של הפעלת התוכן של טסיות DLS-נמדד microparticle. בהתבסס על הידע הנוכחי שלנו כי טסיות מופעל מכילים מספר גבוה של microparticles, הם הם הטובים ביותר בשימוש לטיפול טיפולית של דימום פעיל חולים39, בעוד חולים המטולוגיה-אונקולוגיה תועלת שלא הופעל טסיות דם ללא או רמות נמוכות של microparticles20. לאחרונה דווח כי ההיענות במבחנה של תורם טסיות לא להשפיע באופן משמעותי את השחזור ואת הישרדות של אלה טסיות ב עירויי יחיד לחולים יציב, בעיקר הלא-דימום המטולוגיה-אונקולוגיה40 . מממצא זה, הוא עשוי להיות סיכם כי הפעלת טסיות המזוהה על-ידי תוכן MP גבוהה גם ממלא כל תפקיד משמעותי בטיפול מניעתי של חולים. עם זאת, בשל הבחירה הצר של חולים, מחקר זה לא התייחסו ההשפעה של גורמים התורמים עבור חולים מורכבים שאינם קודח (נכלל מן המחקר), לא יציבה ולקבל עירוי טסיות רק אחד או יותר רבים. השאלה איך ניתן להפחית את המורכבות של המקרים המטופל – אשר טומנת בחובה הבטחה להפחית refractoriness – נותר ללא מענה.
Microparticles מוקדם סמנים של דלקת41,42,43,44 ו טסיות הפעלה45 , ולכן זוהו ב תורמים נורמלי רבים. 19 . כתוצאה מכך, טסיות מופעל, microparticles נמצאים התרומות טסיות. סביר משערים כי חולים עם חום גבוה, קרי, מופעל באופן מלא מולדת מערכת החיסון, לא יכולה לסבול האתגר נוספים של עירוי של טסיות מופעל. עם זאת, מחקרים נדרשים להוכיח השערה זו. הקרנת Microparticle יכול להקל על הוודאות הנוכחי על התוכן של עירויי טסיות ולהפחית את המורכבות של טיפול בחולים.
היחס של טסיות מופעל כדי שלא הופעל בבנק הדם החולים תלוי בעיקר על האוכלוסייה התורם פחותה בהרבה על תחבורה, הקרנה, איון הפתוגן ותהליכים אחרים עלול להגביר טסיות הפעלת ב מרכזת. 19 נתונים מבנקים הדם החולים הגדולים בארצות הברית הראו כי ההרכב הממוצע של המלאי טסיות הוא 49% מופעל, 51% שלא הופעל (טווח עבור מופעל טסיות: 38-62%, תקשורת אישית). אם ספקי המוצר דם או בנקי דם בבית החולים רוצה לדעת תרכיזים טסיות מופעל, שלא הופעל כמה הם מייצרים או לקבל, ואני רוצה לנהל את המלאי שלהם מבוסס על הפעלת טסיות כמצוין microparticle תוכן, זה פרוטוקול ייתכן והמתאים להם.
בהתבסס על הרכב טסיות בנק הדם החולים יוכלו להפנות טסיות שלא הופעל, הומוגני עבור מניעה להשתמש ומופעל, טסיות הטרוגנית לשימוש טיפולית. טסיות ההקרנה מאפשר חולים למקסם את השימוש של מלאי זמין אשר משפר את הטיפול בחולה, הקטנת עלות. פרוטוקול זה מיועד עבור עובדי מעבדה המכירים טיפול בסיסי ומניפולציה של מוצרי דם.
המובאת כאן היא שיטת הקרנה microparticles ב עירויי טסיות זה יכול להיות מיושם באופן שגרתי כדי לנהל את המלאי בנק הדם בבית החולים שבו בחירת מוצר בהתבסס על תוכן microparticle רצוי. המטרה של פרוטוקול זה היא חלוקה לרמות את יישום והערכה של DLS להקרנה של טסיות דם שנתרמו. הפרוטוקול המתואר מענה על שאלות נפוצות של גישה לא פולשנית דגימות, שילוב של בדיקה לתוך זרימת עבודה בנק הדם, ואת מאפייני ביצועים.
פרוטוקול זה מתאר שיטה פיזור אור דינאמי להקרנה microparticle אופטימיזציה עבור ריכוז החלקיקים גבוהה נמצאו דגימות ביולוגיות כגון מתרכזת טסיות. השיטה של DLS יתוקנן מטבעו כדי למדוד במדויק את גודל. ניתן להמיר את הריכוז היחסי של microparticles ריכוז מוחלט אם ריכוז טסיות ידוע והוא האזור שיא טסיות משמש את שיא התייחסות19. כמו טסיות ריכוזים מתקבלים בדרך כלל עם מנתחי המטולוגיה או זרימה cytometers שיטות אלה יכול להיחשב טכנולוגיות לוויה DLS.
הפונקציונליות של מערכת DLS מבוטח על ידי הפעלת שליטה חרוזים באופן קבוע. מים מזוקקים ניתן למדוד כדי לוודא רעש רקע מינימלי. ניתן לנתח אותם סטנדרטים זמינים מסחרית טסיות כפקדי MP-שלילי, לאחר תוספת של 125 nm רדיוס חרוזים, כפקדי MP-חיוביות. בקרב הריכוזים מגוון ביולוגי של MP של הריבית, התהליכים הם מעשי ומהיר לבצע כחלק השגרה בנק הדם.
בניגוד cytometry זרימה, שיטה זו אינה מבוססת על השוואת עוצמות פיזור חלקיקי אבל מעדיף את המהירות של תנועה בראונית שלהם. לפיכך, exosomes ניתן לזהות גם למרות גודלם הזעיר, מדווחים בנפרד MP.
תוכנן ככלי מיון, המגבלות של פעולת שירות זו קשורים יכולתו להבחין בין סוגים שונים של microparticles. יש מקום פוטנציאל לשיפור אם צעדים נוספים בידוד משמשים; דוגמאות נבדק לפני ואחרי הסרת microparticles באמצעות נוגדן ספציפי בשילוב חרוז מגנטי הלכידה. בנוסף, זה לא יכול להניח, כי כל שזוהו microparticles תא נגזר כי chylomicrons נוצר היפרליפידמיה47,48 ו קטן חיידקים או וירוסים6 גם ידווחו בטווח microparticle. עם זאת, הגנה נוספים קיימים בתוך אספקת הדם כדי למנוע מאוד lipemic או טסיות דם מזוהמים כדי להזין את המלאי בנק הדם של בית החולים.
הבחירה של קרישה המדגם משפיע על מידת ההפעלה טסיות ולכן תוכן MP,49. להשוואות של מוצרים שונים גורם זה צריך להיחשב. יתר על כן, החלפת פלזמה עם מדיה ההשעיה חינם MP PAS ישפיע התוכן MP ועל הסף לקביעת הטרוגניות-אם רק כשליש התוכן MP המקורי נשאר בתוך פלזמה שיורית ב תרכיז בהתאם הסף התחתון של תוכן MP יציין את אותה רמת טסיות הפעלה כמו פלזמה 100%. MP אחוז הוא התוכן MP ביחס טסיות. בעבר דווח כי ספירת טסיות ממוצע של המוצר PAS היה נמוך כך % ממוצע MP עדיין היה 9.5%19. הסף % MP עבור טסיות PAS ברישיון בארצות הברית מוגדר כרגע 10%.
המקור העיקרי של MP בתרכיזים טסיות הוא התורם, התהליכים שגורמים ללחץ כדי טסיות יהיה להעלות את רמת MP בהתאם הרגישות של טסיות הדם להדגיש-אם כבר מאוד מופעלים טסיות, מינורי לחצים כגון להאריך חיי מדף, איון הפתוגן, הכביסה, הקרנה או בתחבורה הבינעירונית עלול להוביל עלייה משמעותית בתוכן MP. אף אחד לחצים אלו הוכחו להשפיע באופן משמעותי על טסיות הומוגנית, שלא הופעל19. בנוסף, תשומת הלב צריכה להיות שילם על פוטנציאל עבור שינויים בהרכב מדגם בתוך נימי אם לא נבדקה מיד לאחר ההכנה (בסיום שלב 3 של פרוטוקול זה).
המוקד של פרוטוקול זה היא לקבוע את ההרכב של חלקיקים נוכח עירויי טסיות, להשתמש microparticles כמו סמנים ביולוגיים של הפעלת טסיות. עירויי טסיות הן מתויגות כ או שלא הופעל (כתום) או מופעל (ורוד) מבוסס על סף אחוז microparticle של 15%. הסף של 15% MP של טסיות בפלסמה 100% נקבע מדעית כמוהאחוזון ה ממוצע 66 מאתרים מרובים .
המטרה של ניהול מלאי טסיות בהתבסס על microparticle שגרתית ההקרנה עם DLS היא לשפר את החולה לטיפול, נסיעה מתוחזקות על ידי מניעת refractoriness טסיות-החיסון. מימוש מערכת DLS להקרנה של טסיות תיקים תאפשר למשתמש לכוון שלא הופעל טסיות לאוכלוסיות החולה ביותר בסיכון לפתח refractoriness טסיות.
The authors have nothing to disclose.
אנו מודים התורמים דם ואנשי במרכז הרשת שירותי הדם הקנדית לפיתוח חלה על אוסף והפקה של יחידות טסיות השתמשו במחקר זה. אנו להכיר קרן קנדה על חדשנות ועל קרן מייקל סמית למחקר בריאות למימון תשתיות במרכז UBC למחקר דם. מימון עבור הפרסום סופק על ידי LightIntegra טכנולוגיה inc., יצרן של ThromboLUX.
ThromboLUX-M | LightIntegra Technology Inc. | LPN120 | DLS System |
ThromboSight Software | LightIntegra Technology Inc. | LPN124 | DLS analysis software |
Capillaries | LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Optinova MLE) | LPN065 | Custom extruded non-activating, non-birefringent plastic tube, inspected and irradiated |
MiniPet | LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor TriContinent Scientific) | LPN082 | 100 µL fixed volume pipette for sampling |
MicroFlex 1-200 µL Pipette tips | LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor ESBE Scientific) | LPN080 | Pipette tips for sampling |
Critoseal | LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Fisher Scientific) | LPN075 | Capillary Tube Sealant |
Dukal Alcohol Pad or equivalent | LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Dukal Corp.) | LPN085 | Isopropyl pad (saturated with 70% isopropyl alcohol) |
Control beads, 50 nm radius | LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor PolySciences Inc.) | LPN128 | Control beads |
Microbead NIST Traceable Particle Size Standard, 3 µm | PolySciences Inc. | 64060 | Standard microbeads: 1.5 µm radius Polystyrene beads; range 1.43-1.58 µm; 1% solids suspensions in de-ionized water |
Nanobead NIST Traceable Particle Size Standard, 250 nm | PolySciences Inc. | 64014-15 | Standard nanobeads: 125 nm radius Polystyrene beads; range 120 – 130 nm; 1% solids suspensions in de-ionized water |
Genesis BPS RapidSeal II or equivalent | Genesis BPS | 428-SE640 | Tube sealer |
Fresenius Kabi Tube Stripper or equivalent | Fresenius Kabi | 6R4452 | Manual tube stripper |
Biohazard Shield – Cell Counter or equivalent | CardinalHealth | S1389-75 | Splash Shield |
Corning LSE Vortex Mixer or equivalent | Corning Incorporated | 6775 | Vortex mixer |
FACSCanto II Flow cytometer with FACSDiva software version 6.1.3 or equivalent | BD Biosciences | 338960 | Flow cytometer |