Summary

השרשה ורישום האלחוטי electroretinogram ופוטנציאל חזותי מעורר אצל חולדות Conscious

Published: June 29, 2016
doi:

Summary

אנחנו מראים נהלי השתלת הקלטה כירורגית למדוד אותות חזותיים אלקטרו מן העין (electroretinogram) והמוח (ויזואלי עורר פוטנציאל) בחולדות מודעות, וזה יותר מקביל למצב האנושי שבו הקלטות מתנהלות ללא מקעקעת הרדמה.

Abstract

Electroretinogram שדה מלא (ERG) ופוטנציאל חזותי עורר (VEP) הם כלי שימושי כדי להעריך רשתית ויושרה מסלול ויזואלי הן במעבדה והן במסגרות קליניות. נכון לעכשיו, מדידות ERG ו VEP פרה-קליניות מבוצעות בהרדמה כדי להבטיח מיקומים אלקטרודה יציבים. עם זאת, עצם הנוכחות של הרדמה הוכחה לזהם תגובות פיסיולוגיות נורמליות. כדי להתגבר מקעקעת הרדמה אלו, אנו מפתחים פלטפורמה חדשנית assay ERG ו VEP בחולדות מודעות. אלקטרודות הושתלו תת-conjunctivally על העין כדי assay את ERG ו epidurally על קליפת הראייה למדוד את VEP. מגוון של משרעת ורגישות / פרמטרי תזמון assayed הוא ERG ו VEP להגדיל אנרגיות זוהרות. אותות ERG ו VEP מוצגים להיות יציב דיר לפחות השתלת 4 שבועות לאחר ניתוח. יכולת זו כדי להקליט אותות ERG ו VEP ללא הרדמה מקעקעת בשנות ה פרה-קלינייםetting אמור לספק תרגום מעולה נתונים קליניים.

Introduction

ERG ו VEP הם פולשנית בכלי vivo להעריך את תקינות מסלולים רשתית וחזותיים בהתאמה בשנייה במעבדת המרפאה. התנאים המלאים שדה ERG מניב צורת גל מאפיין אשר יכול להיות שבור למטה לתוך רכיבים שונים, כאשר כל יסוד המייצג כיתות תאים שונים של 1,2 מסלול הרשתית. צורת גל ERG השדה מלא הקלאסיקה מורכבת של שיפוע שלילי ראשוני (א-גל), אשר הוכח לייצג חשיפה לאור קולטי אור פעילות פוסט 2-4. א-גל ואחריו גל חיובי משמעותי (ב-גל) המשקף פעילות חשמלית של הרשתית במרכז, בעיקר תאי ON-דו קוטבית 5-7. יתר על כן, אפשר לשנות אנרגיה זוהרת היתר עם ​​עוררות יתר מרווח לבודד חרוט מתגובות מוט 8.

המבזק VEP מייצג פוטנציאל חשמלי של גזע קליפת המוח החזותית בתגובה לגירוי אור ברשתית9,10. צורת גל זה יכול להיות שבור למטה לתוך רכיבים מוקדמים ומאוחרים, עם רכיב מוקדם המשקף את פעילות של נוירונים של מסלול retino-geniculo-striate 11-13 ומרכיב מאוחר המייצג עיבוד קליפת המוח מתבצע רבדים V1 שונים בחולדות 11,13. לכן מדידה בו זמנית של ERG ו VEP חוזרת הערכה מקיפה של המבנים המעורבים המסלול ויזואלי.

נכון לעכשיו, על מנת לרשום אלקטרופיזיולוגיה בחיות, הרדמה הוא מועסק כדי לאפשר מיקום יציב של אלקטרודות. נעשו ניסיונות למדוד ERG ו VEP בחולדות מודע 14-16 אך מחקרים אלה המועסקים התקנה קווית, אשר יכול להיות מסורבל שעלול להביא ללחץ חיה בהגבלת חופש התנועה של בעלי חיים התנהגות טבעית 17. עם התקדמות בטכנולוגיה אלחוטית כולל מזעור משופר וחיי סוללה, ניתן כיום ליישם גישה טלמטריה עבור ERGהקלטת ד VEP, ומקטינה את הלחץ הקשור קלטות קווים ושיפור כדאיים לטווח ארוך. לגמרי הפנימו השתלות יציבות של בדיקות טלמטריה הוכיחו להיות מוצלח לניטור כרוני של טמפרטורה, לחץ דם 18, פעילות 19 וכן electroencephalography 20. התפתחויות אלו בטכנולוגיה תסייענה גם עם דירות ויציבות של הקלטות מודעות, הגדלת השירות של הפלטפורמה ללימודים כרוניים.

Protocol

הצהרת אתיקה: ניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם לקוד האוסטרלי עבור הטיפול ושימוש בחיות למטרות מדעיות (2013). אתיקה אישור בעלי חיים הושג מוועדת האתיקה בעלי חיים, אוניברסיטת מלבורן. החומרים במסמך זה הנם עבור ניסויי מעבדה בלבד, ולא מיועדים לשימוש רפואי או וטרינרים. <p class="jove_title…

Representative Results

תגובת קולטי האור מנותחת על ידי התאמת גאוס בפיגור על הקצה המוביל של איבר היורד הראשוני של תגובת ERG ב -2 האנרגיות המאירות העליונות (1.20, 1.52 יומן CSM -2) עבור כל חיה, על פי המודל של כבש Pugh 22, שגובשה על ידי הוד ליבנה 23. נוסחא זו המחזירה משרעת פרמ…

Discussion

בשל אופיו פולשנית של אלקטרופיזיולוגיה חזותית, קלטות ERG ו VEP בחולים אנושיים מתנהלות בתנאים מודעים רק דורשות שימוש בהרדמה מקומית עבור מיקום האלקטרודה. לעומת זאת, אלקטרופיזיולוגיה חזותי במודלים של בעלי חיים מתנהל כמקובל בהרדמה כללית כדי לאפשר מיקום האלקטרודה יציב על י?…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

JC would like to acknowledge the David Hay Memorial Fund, The University of Melbourne for financial support in writing this manuscript. Funding for this project was provided by an ARC Linkage grant 100200129 (BVB, AJV, CTON).

Materials

Bioamplifier ADInstruments ML 135 Amplifies ERG and VEP signals
Carboxymethylcellulose sodium 1.0% Allergan CAS 0009000-11-7 Maintain corneal hydration during surgery
Carprofen 0.5% Pfizer Animal Health Group CAS 53716-49-7 Post-surgery analgesia, given with injectable saline for fluid replenishment
Chlorhexadine 0.5% Orion Laboratories 27411, 80085 Disinfection of surgical instrument
Cyanoacrylate gel activator RS components 473-439 Quickly dries cyanoacrylate gel
Cyanocrylate gel  RS components 473-423 Fix stainless screws to skull
Dental burr Storz Instruments, Bausch and Lomb E0824A Miniature drill head of ~0.7mm diameter for making a small hole in the skull over each hemisphere to implant VEP screws
Drill Bosch Dremel 300 series Automatic drill for trepanning
Enrofloxin Troy Laboratories Prophylactic antibiotic post surgey
Ganzfeld integrating sphere Photometric Solutions International Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size
Gauze swabs Multigate Medical Products Pty Ltd 57-100B Dries surgical incision and exposed skull surface during surgery
Isoflurane 99.9% Abbott Australasia Pty Ltd CAS 26675-46-7 Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for VEP electrode implant surgery
Kenacomb ointment Aspen Pharma Pty Ltd To reduce skin irritation and itching after surgery
Luxeon LEDs Phillips Lighting Co. For light stimulation, twenty 5 watt and one 1 watt LEDs, controlled by Scope software
Needle (macrosurgery) World Precision Instruments 501959 for suturing abdominal and head surgery, used with 3-0 suture, eye needle, cutting edge 5/16 circle Size 1, 15mm
Needle holder (macrosurgery) World Precision Instruments 500224 To hold needle during abdominal and head surgery
Needle holder (microsurgery) World Precision Instruments 555419NT To hold needle during ocular surgery
Optiva catheter Smiths Medical International LTD 16 or 21 G Guide corneal active electrodes from skull to conjunctiva
Povidone iodine 10% Sanofi-Aventis CAS 25655-41-8 Proprietory name: Betadine, Antiseptic to prepare the shaved skin for surgery 10%, 500 mL
Powerlab data acquisition system ADInstruments ML 785 Acquire signal from telemetry transmitter, paired to telemetry data converter
Proxymetacaine 0.5% Alcon Laboratories  CAS 5875-06-9 Topical ocular analgesia
Restrainer cutom made Front of the restrainer is tapered to minimize head movement, length can be adjusted to accommodate different rat length, overall diameter is 60 mm. 
Scapel blade R.G. Medical Supplies SNSM0206 For surgical incision
Scissors (macrosurgery) World Precision Instruments 501225 for cutting tissue on the abodmen and forhead
Scissors (microsurgery) World Precision Instruments 501232 To dissect the conjunctiva for electrode attachment
Scope Software ADInstruments version 3.7.6 Simultaneously triggers the stimulus via the ADI Powerlab system and collects data
Shaver Oster Golden A5 Shave fur from surgical areas
Stainless streel screws  MicroFasteners L001.003CS304 0.7 mm shaft diameter, 3 mm in length 
Stereotaxic frame David Kopf Model 900 A small animal stereotaxic instrument for locating the implantation landmarks on the skull
Surgical drape Vital Medical Supplies GM29-612EE Ensure sterile enviornment during surgery
Suture (macrosurgery) Ninbo medical needles 3-0 for suturing abdominal and head surgery, sterile silk braided, 60cm
Suture needle (microsurgery) Ninbo medical needles 8-0 or 9-0 for ocular surgery including, suturing electrode to sclera and closing conjunctival wound, nylon suture, 3/8 circle 1×5, 30cm
Telemetry data converter  DataSciences International R08 allows telemetry signal to interface with data collection software
Telemetry Data Exchange Matrix DataSciences International Gathers data from transmitters, pair with receiver
Telemetry data receiver DataSciences International RPC-1 Receives telemetry data from transmitter
Telemetry transmitter DataSciences International F50-EEE 3 channel telemetry transmitter
Tropicamide 0.5% Alcon Laboratories  Iris dilation
Tweezers (macrosurgery) World Precision Instruments 500092 Manipulate tissues during abdominal and head surgery
Tweezers (microsurgery) World Precision Instruments 500342 Manipulate tissues during ocular surgery

Referencias

  1. Frishman, L. J. . Origins of the Electroretinogram. , (2006).
  2. Granit, R. The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve. J Physiol. 77, 207-239 (1933).
  3. Brown, K. T. The eclectroretinogram: its components and their origins. Vision Res. 8, 633-677 (1968).
  4. Brown, K. T., Murakami, M. Biphasic Form of the Early Receptor Potential of the Monkey Retina. Nature. 204, 739-740 (1964).
  5. Kline, R. P., Ripps, H., Dowling, J. E. Generation of b-wave currents in the skate retina. Proc Natl Acad Sci U S A. 75, 5727-5731 (1978).
  6. Krasowski, M. D., et al. Propofol and other intravenous anesthetics have sites of action on the gamma-aminobutyric acid type A receptor distinct from that for isoflurane. Mol Pharmacol. 53, 530-538 (1998).
  7. Stockton, R. A., Slaughter, M. M. B-wave of the electroretinogram. A reflection of ON bipolar cell activity. J Gen Physiol. 93, 101-122 (1989).
  8. Nixon, P. J., Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. The contribution of cone responses to rat electroretinograms. Clin Experiment Ophthalmol. 29, 193-196 (2001).
  9. Weinstein, G. W., Odom, J. V., Cavender, S. Visually evoked potentials and electroretinography in neurologic evaluation. Neurol Clin. 9, 225-242 (1991).
  10. Sand, T., Kvaloy, M. B., Wader, T., Hovdal, H. Evoked potential tests in clinical diagnosis. Tidsskr Nor Laegeforen. 133, 960-965 (2013).
  11. Brankack, J., Schober, W., Klingberg, F. Different laminar distribution of flash evoked potentials in cortical areas 17 and 18 b of freely moving rats. J Hirnforsch. 31, 525-533 (1990).
  12. Creel, D., Dustman, R. E., Beck, E. C. Intensity of flash illumination and the visually evoked potential of rats, guinea pigs and cats. Vision Res. 14, 725-729 (1974).
  13. Herr, D. W., Boyes, W. K., Dyer, R. S. Rat flash-evoked potential peak N160 amplitude: modulation by relative flash intensity. Physiol Behav. 49, 355-365 (1991).
  14. Guarino, I., Loizzo, S., Lopez, L., Fadda, A., Loizzo, A. A chronic implant to record electroretinogram, visual evoked potentials and oscillatory potentials in awake, freely moving rats for pharmacological studies. Neural Plast. 11, 241-250 (2004).
  15. Szabo-Salfay, O., et al. The electroretinogram and visual evoked potential of freely moving rats. Brain Res Bull. 56, 7-14 (2001).
  16. Valjakka, A. The reflection of retinal light response information onto the superior colliculus in the rat. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 245, 1199-1210 (2007).
  17. Lapray, D., Bergeler, J., Dupont, E., Thews, O., Luhmann, H. J. A novel miniature telemetric system for recording EEG activity in freely moving rats. J Neurosci Methods. 168, 119-126 (2008).
  18. Lim, K., Burke, S. L., Armitage, J. A., Head, G. A. Comparison of blood pressure and sympathetic activity of rabbits in their home cage and the laboratory environment. Exp Physiol. 97, 1263-1271 (2012).
  19. Nguyen, C. T., Brain, P., Ivarsson, M. Comparing activity analyses for improved accuracy and sensitivity of drug detection. J Neurosci Methods. 204, 374-378 (2012).
  20. Ivarsson, M., Paterson, L. M., Hutson, P. H. Antidepressants and REM sleep in Wistar-Kyoto and Sprague-Dawley rats. Eur J Pharmacol. 522, 63-71 (2005).
  21. He, Z., Bui, B. V., Vingrys, A. J. The rate of functional recovery from acute IOP elevation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 4872-4880 (2006).
  22. Lamb, T. D., Pugh, E. N. A quantitative account of the activation steps involved in phototransduction in amphibian photoreceptors. J Physiol. 449, 719-758 (1992).
  23. Hood, D. C., Birch, D. G. Rod phototransduction in retinitis pigmentosa: estimation and interpretation of parameters derived from the rod a-wave. Invest Ophthalmol Vis Sci. 35, 2948-2961 (1994).
  24. Charng, J., et al. Conscious wireless electroretinogram and visual evoked potentials in rats. PLoS Onez. 8, e74172 (2013).
  25. Galambos, R., Szabo-Salfay, O., Szatmari, E., Szilagyi, N., Juhasz, G. Sleep modifies retinal ganglion cell responses in the normal rat. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 2083-2088 (2001).
  26. Meeren, H. K., Van Luijtelaar, E. L., Coenen, A. M. Cortical and thalamic visual evoked potentials during sleep-wake states and spike-wave discharges in the rat. Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 108, 306-319 (1998).
  27. Nair, G., et al. Effects of common anesthetics on eye movement and electroretinogram. Doc Ophthalmol. 122, 163-176 (2011).
  28. Amouzadeh, H. R., Sangiah, S., Qualls, C. W., Cowell, R. L., Mauromoustakos, A. Xylazine-induced pulmonary edema in rats. Toxicol Appl Pharmacol. 108, 417-427 (1991).
  29. Charng, J., et al. Retinal electrophysiology is a viable preclinical biomarker for drug penetrance into the central nervous system. J Ophthalmol. , (2016).

Play Video

Citar este artículo
Charng, J., He, Z., Bui, B., Vingrys, A., Ivarsson, M., Fish, R., Gurrell, R., Nguyen, C. Implantation and Recording of Wireless Electroretinogram and Visual Evoked Potential in Conscious Rats. J. Vis. Exp. (112), e54160, doi:10.3791/54160 (2016).

View Video