Étiquetage immunohistologique des microtubules dans dendrites des neurones sensoriels, trachées et les muscles dans la Drosophile Mur Corps Larve
Summary
Pour comprendre comment les formes cellulaires complexes, comme les dendrites neuronales, sont atteints au cours du développement, il est important d'être en mesure de précision de dosage organisation des microtubules. Nous décrivons ici une méthode de marquage immunohistochimique robustes afin d'examiner l'organisation des microtubules des cellules dendritiques dendrites des neurones sensoriels arborisation, la trachée, les muscles et les autres<em> Drosophile</em> Tissus du corps larvaire mur.
Abstract
Pour comprendre comment les différences dans les formes cellulaires complexes sont atteints, il est important de suivre avec précision l'organisation des microtubules. Le mur de la drosophile corps des larves contient plusieurs types de cellules qui sont des modèles pour étudier des cellules et la morphogenèse des tissus. Par exemple trachées sont utilisées pour examiner une morphogenèse du tube, et l'arborisation dendritique (DA) des neurones sensoriels de la larve de drosophile sont devenus un système de primaires pour l'élucidation des généraux et des neurones spécifiques à la classe des mécanismes de différenciation dendritiques de 2-5 et une dégénérescence 6 .
La forme des branches des dendrites peut varier considérablement entre les classes de neurones, et même entre les différentes branches d'un seul neurone 7,8. Les études génétiques suggèrent que les neurones DA différentiel de l'organisation du cytosquelette peuvent sous-tendre les différences morphologiques en forme la branche dendritiques 4,9-11. Nous fournissons une méthode immunologique robuste à un étiquetagessay dans l'organisation des microtubules in vivo chez DA sensorielle tonnelle neurone dendrite (figures 1, 2, Film 1). Ce protocole illustre la dissection et immunomarquage du stade larvaire d'abord, un stade où les actifs excroissance sensorielle dendrites des neurones et l'organisation de branchement se produit 12,13.
En plus de coloration des neurones sensoriels, cette méthode permet d'obtenir l'étiquetage robuste de l'organisation des microtubules dans les muscles (Cinéma 2, 3), la trachée (figure 3, Film 3), et d'autres tissus de la paroi du corps. Il est précieux pour les chercheurs souhaitant analyser l'organisation des microtubules in situ dans la paroi du corps où l'étude des mécanismes de contrôle et que le tissu forme des cellules.
Protocol
Discussion
Pour comprendre comment des formes complexes cellulaires sont qu'elle atteint est important d'être en mesure de précision de dosage organisation des microtubules. Nous décrivons ici une méthode de marquage robuste immunohistologiques à l'organisation des microtubules dendritiques dosage des dendrites des neurones sensoriels arborisation. En plus de coloration des neurones sensoriels, cette méthode permet d'obtenir robustes coloration immunohistochimique de la trachée, muscles et autres tissus de l…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions RIKEN pour le financement. P10-Gal4 a été un cadeau genre d'Alain Vincent (Université Paul Sabatier, Toulouse, France).
Materials
| Name of the reagent | Company |
Catalogue number |
Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Forceps | Dumont | 11251-20 | |
| Microscissors | FST | 15000-08 | |
| Mouse anti-α-tubulin (Clone: DM1A) | Sigma | T9026 | Dilution 1/1000 |
| Mouse anti-Futsch (Clone: 22C10), supernatant |
Developmental Studies Hybridoma Bank |
22C10 | Dilution 1/1000 |
| Rat anti-CD8 (Clone: 5H10) | Caltag | MCD0800 | Dilution 1/1000 |
| Alexa Fluor 488 anti-mouse IgG | Invitrogen | A-11001 | Dilution 1/500 |
| Cy3 anti-Rat IgG | Jackson Immunoresearch | 712-166-150 | Dilution 1/200 |
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