根结线虫的高和低通量筛选根结线虫。</em

1。番茄幼苗生长在花盆和托盘用于盆栽试验，在富含有机质的土壤，如阳光混合的单罐厂番茄种子。在温室保持在22-28°C。发芽后，施肥每周一次奇迹格罗。 发芽后约两个星期，在这两个真正的叶阶段，移植到无菌的沙质土壤沙90％和10％的有机组合与充满盆（直径10厘米和17厘米深）单独苗。 Osmocote缓释肥料在温室两周保持在22-28°C。继续奇迹格罗每周一次的植物施肥。 对于高通量筛选，直接在托盘在沙质土壤的植物种子，用保鲜膜覆盖的托盘，直到发芽，保持以上。发芽后，加Osmocote缓控释肥，施肥和每周一次的奇迹格罗。 2。豇豆幼苗生长袋小号电火工品是在培养皿​​中发芽，内衬几层Kimwipe纸，单独转移到袋或直接放在袋纸槽和发芽。 挂着一个塑料文件夹，每个文件夹中放置袋，并安排在垂直位置的机架中的文件夹。放置在温度25-28°C和16 h光照/ 8 h黑暗周期保持在一个受控环境室的机架。机架也可以保持在温室，但需要陪衬或植物茎的两侧放置在机架上的僵硬的纸盖，以减少真菌污染的潜力。 水袋与反渗透水，每天一次或两次。播种后约10至14天，已开发足够的根系统具有大专根尖（ 图1），苗接种准备。 3。线虫虫卵提取电子商务的提取感染根GGS修改赫西和巴克（1973）开发了一个协议。 线虫三到四天之前，提取感染番茄根部的根结线虫卵。鸡蛋提取开始之前，工作区用热水洗脸，彻底避免污染。也是在热水冲洗搅拌机，两桶水，丝网的支持下，橡胶锤，三筛425，90和25微米的孔径，量筒和剪刀。 堆栈按照下列顺序从上到下筛：425，90和25微米的孔径。 25微米筛上的鸡蛋将被收集在底部。放在水槽支持丝网筛。丝网下把水桶收集贯通的解决方案。 作为接种源，切断受感染的植物（S）的上衣，并丢弃。小心取出锅​​厂。根洗净，浸在装满水的塑料桶。下冲洗进一步运行的根源宁水，直到土壤颗粒从根部洗净。 切剪刀切成小块的根源。处置的主根。 把盖在一个大塑料瓶从单一植物切碎的根，刚够10％的漂白粉溶液覆盖的根源，并盖上盖子。 摇动罐子含2分钟的根源。 打开罐子，倒入到顶端筛根，并用软管连接到一个喷雾喷嘴。洗井，直到所有的漂白剂气味消失了。使用木槌挖掘，以避免堵塞筛孔筛双方。 卸下顶部筛和冲洗的第二个筛子上的杂物。 删除第二个筛子，并收取罚款的碎片，其中包括鸡蛋，从去年筛。从一瓶水的温柔流，将杂物筛一侧。收集到一个干净的烧杯中水的最低金额碎片和鸡蛋。 筛一次水收集在通过25微米筛收集任何可能逃脱的蛋桶。用水冲洗干净，并收集在同一烧杯。 丢弃从顶部筛植物碎片和压水彻底清洗所有三个筛子。请勿触摸网的一部分，因为它可能会扭曲孔径的筛子。 4。孵化线虫虫卵行清洁的金属与几层Kimwipe纸的篮子，适合在玻璃培养皿。允许一个篮子和盘子的底部之间的1厘米的距离。 在纸张上提取的线虫虫卵倒在篮筐。加入足够的液体，使篮筐底部接触水面，但不是浸泡在水中。盖上一个塑料盖的顶部。 每天检查水分蒸发，在培养皿中添加一些水，使篮子的底部接触的水。这将防止干燥鸡蛋。 隔日，收集佤之三，包含到一个烧杯，培养皿J2S。如果不立即使用，实验室供气或水族馆泵产生的空气通气在室温下使用所收集的接种。使用2天之内的曝气接种。的J2S可能收集超过6-8天期间设立的孵化。 5。番茄根在花盆或托盘和评估感染感染使用三等分收集线虫计数的幻灯片或菜J2S数量来计算，计算平均值，并确定为接种所需的音量。通常3000 J2S使用单株盆栽植物种植在育苗盘和500 J2S。 搅拌磁性板在低速搅拌接种。 之前接种植物，确保土壤湿润，但不要太湿。锅接种，在每个番茄根系统使用铅笔周围的沙孔，深度约一半锅（ 图2 </强>）。接种到三个孔用吸管J2S提供每个工厂。此后，包括孔。 对于托盘的高通量筛选，用孔上粘到5毫升枪头沿移液器（ 图3），提供入土壤J2S双方修改后的密封尖端针。此外，线虫可交付步骤5.3。 温室中的植物保持在24-27°C的六到八周。继续奇迹格罗每月两次施肥。 感染的评价，小心取出从盆的植物和洗根（步骤3.3中所述）。 染色15分钟，淹没在1毫克/升erioglaucine根蓝色的蛋群众。 水冲洗根和评估计数彩绘蛋群众对个别根系统。一个发光的桌子放大镜可以用来帮助可视化的蛋群众。 如果筛选的植物都需要进一步Ğenetic研究，不削减洗涤前评价根的顶部。染色和计数的卵块后，移植在有机土壤的树苗，修剪顶部，大量减少蒸腾，并保持在一个温室。 6。豇豆根感染感染的邮袋和评价计数线虫接种和磁力搅拌板搅拌，如前面所述。 删除水平的表面上悬挂的文件夹和地方的邮袋。接种5毫升在1500 J2S每个邮袋。提起袋的塑料盖，并均匀地分布在根表面的线虫。 24小时后接种黑纸覆盖排除光，保持在一个水平位置的袋，然后返回到生长室吊夹。 需要水的植物，一次或两次，每天，半强度霍格兰的解决方案（霍格兰德嫩，1950年， 表1 </STRONG>）观察直到化肥的响应，通常增强观叶绿化和新梢生长更加旺盛。一般植物的半强度霍格兰连续3天浇水。此后，保持袋与水的滋润。 接种后约30天（范围28-35天），注入约10-20毫升75毫克/升erioglaucine每个邮袋。保持一夜之间淹没在水平位置与染料袋。 漏袋和评估计数照明办公桌放大镜下的蛋群众的根系统。 如果筛选植物需要进一步的遗传研究或育种工作，精心拉出的根源，从纸张，移植在花盆里的土壤有机和保持在一个温室。 7。代表结果两个系统的线虫接种番茄和豇豆植物的适当阶段，显示在图1和2。此外，番茄和豇豆感染根的例子在图4和图5所示。至于在大多数抗病屏幕的，最好是使用至少6-10％的基因型植物线虫来计算，平均感染率。相同的基因型，植物之间的感染线虫的变化，可以减少使用统一的工厂规模和准确的数量和交货的接种。 托盘和增长袋的使用，使筛选数百数以千计的植物在一个小的增​​长空间。增长袋也让没有必要洗根（ 图4）快速，高效的根结线虫感染的非破坏性评估。 图1。两个周龄的豇豆植物生长在一个小袋，并准备为根结NEMAtode接种。 图2。三个星期岁番茄根结线虫接种的准备。 图3。一种改进的针头和枪头，用于高通量的线虫接种。一针的底部是密封的，和3套孔钻针在使用激光束。然后，修改后的针粘到5毫升的枪头。 图4。感染根结线虫番茄的根系统。 一个豇豆染色erioglaucine接种后30天内增长的鸡蛋群众的根系统图5。28°C。