נוירונים בוגרים שנולדו של הנורה חוש הריח יכול להיות נשלט באמצעות optogenetically Channelrhodopsin2-לבטא הזרקת lentiviral בזרם נודדות מקורי ו photostimulation כרונית עם מיניאטורי מושתל LED.
Interneurons מקומיות מחדש ברציפות הנורה חוש הריח של מכרסמים הבוגרת 1-3. בתהליך זה, הנקרא neurogenesis למבוגרים, בתאי גזע עצביים בקירות החדר לרוחב להצמיח neuroblasts הנודדים של מילימטרים אחדים לאורך הנחל נודדות מקורי (RMS) כדי להגיע לשלב לתוך הנורה חוש הריח. כדי לחקור את השלבים השונים ואת ההשפעה של שילוב בוגרים שנולדו לתוך נוירון preexisting מעגלים חוש הריח, יש צורך סלקטיבי התווית לתפעל את הפעילות של האוכלוסייה הספציפי הזה של נוירונים. ההתפתחות האחרונה של optogenetic טכנולוגיות מציעה את ההזדמנות כדי להשתמש באור כדי להפעיל את זה בדיוק קבוצה ספציפית של נוירונים מבלי להשפיע על נוירונים סביב 4,5. כאן, אנו מציגים סדרה של נהלים virally להביע Channelrhodopsin2 (ChR2)-YFP במדגם מוגבלת temporally של neuroblasts ב RMS לפני שהם מגיעים הנורה הריח ולהיות מבוגר יליד נהurons. בנוסף, אנו מראים כיצד לכייל את השתל מיניאטורי LED עבור כרונית גירוי vivo של ChR2-לבטא נוירונים.
כלים Optogenetic הגדילו לאחרונה השליטה שלנו באוכלוסיות עצביות סלקטיבית, כולל נוירונים נולד מבוגר במערכת ההרחה. כאן אנו מתארים כיצד לבצע הזרקה stereotaxic של וקטור lentiviral להביע ChR2-YFP באוכלוסייה ספציפית של מבוגר יליד נוירונים. על ידי בקפידה ניטור בתקופה שלאחר הזריקה, אנו מסוגלים ?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי חברת ביטוח החיים "Novalis-Taitbout", Ecole des Neurosciences de Paris (ENP), את Agence Nationale de la משוכלל ונדיר "ANR-09-NEUR-004" במסגרת של "נוירון ERA-NET" של FP7 התוכנית על ידי הנציבות האירופית, "קרן לשפוך la משוכלל ונדיר Medicale", קרן Letten וקרן פסטר.
Material | Company | Catalogue No. |
Ketamine | Merial | Imalgène 1000 |
Xylazine | Bayer Health Care | Rompum 0.2% |
Pipette Puller | Sutter | P-97 |
Glass Capillaries (3.5″) | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
Nanoject II Microinjector | Drummond Scientific | 3-000-204 |
High speed surgical drill | Fine Science Tools | 18000-17 |
Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 |
LED CMS blue 4.6 W | OSRAM | LBW5SN |
Female electrical connector (2.54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z |
Current controller for LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 |
Pulse generator | AMPI | Master-8 |
Optical power meter | Thor Labs | PM100 |
Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 454 |
Polycarboxylate cement (first layer cement) | Septodont | Selfast (#0068Q) |
Methacrylate cement (second layer cement) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad – Liquid (#339292) Unifast Trad – Powder (#339114) |
Carprofen | Pfizer | Rimadyl |