Селективный Вирусный трансдукция взрослых происхождения обонятельных нейронов при хроническом В естественных условиях Optogenetic Стимуляция
Summary
Взрослый происхождения нейроны обонятельной луковицы можно управлять с помощью optogenetically Channelrhodopsin2 экспрессией лентивирусов инъекций в ростральной миграционных потоков и хронических фотостимуляции с имплантированным миниатюрный светодиод.
Abstract
Местное интернейронов постоянно регенерируются в обонятельной луковице взрослого грызунов 1-3. В ходе этого процесса, называемого взрослого нейрогенеза, нервные стволовые клетки в стенках бокового желудочка приводит к нейробластов, которые мигрируют на несколько миллиметров по ростральной миграционных потоков (RMS), чтобы достичь и включить в обонятельной луковице. Для изучения различных этапов и влияния взрослых родился нейронов интеграция в существующий обонятельных схем, необходимо выборочно этикетки и манипулировать деятельности этой специфической популяции нейронов. Недавнее развитие optogenetic технологий дает возможность использовать свет, чтобы активировать именно этой конкретной когорты нейронов, не затрагивая окружающих нейронов 4,5. Здесь, мы представляем ряд процедур, чтобы выразить вирусно Channelrhodopsin2 (ChR2)-в YFP временно запрещен когорте нейробластов в RMS, не дожив до обонятельной луковицы и стать взрослым родился пеurons. Кроме того, мы покажем, как имплантат и калибровки миниатюрный светодиод в естественных условиях хронической стимуляции ChR2-экспрессирующих нейронов.
Protocol
Discussion
Optogenetic инструментов в последнее время увеличили контроль над селективные нейронных популяций, в том числе взрослых родился нейроны обонятельной системы. Здесь мы опишем, как выполнять стереотаксической инъекции лентивирусов вектор выражения ChR2-YFP в конкретной популяции взрослых род?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана компания по страхованию жизни "Новалис-Тетбу", Школе нейронаук Парижской (ЕПС), Национальное агентство по La Recherche "ANR-09-NEUR-004" в рамках "ERA-NET нейрона" из FP7 программы Европейской комиссии ", Фонд залить La Recherche Medicale", Letten фонда и Фонда Пастера.
Materials
| Material | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 |
| Xylazine | Bayer Health Care | Rompum 0.2% |
| Pipette Puller | Sutter | P-97 |
| Glass Capillaries (3.5″) | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
| Nanoject II Microinjector | Drummond Scientific | 3-000-204 |
| High speed surgical drill | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 |
| LED CMS blue 4.6 W | OSRAM | LBW5SN |
| Female electrical connector (2.54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z |
| Current controller for LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 |
| Pulse generator | AMPI | Master-8 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM100 |
| Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 454 |
| Polycarboxylate cement (first layer cement) | Septodont | Selfast (#0068Q) |
| Methacrylate cement (second layer cement) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad – Liquid (#339292) Unifast Trad – Powder (#339114) |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl |
Referencias
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ. J. Neurosci. 28, 11089-11102 (2008).
- Mouret, A. Learning and survival of newly generated neurons: when time matters. J. Neurosci. 28, 11511-11516 (2008).
- Bardy, C. How, when, and where new inhibitory neurons release neurotransmitters in the adult olfactory bulb. J. Neurosci. 30, 17023-17034 (2010).
- Haubensak, W. Genetic dissection of an amygdala microcircuit that gates conditioned fear. Nature. 468, 270-276 (2010).
- Zhang, F. Multimodal fast optical interrogation of neural circuitry. Nature. 446, 633-639 (2007).
- Wang, X., McManus, M. Lentivirus Production. J. Vis. Exp. (32), e1499-e1499 (2009).
- Cardin, J. A. Targeted optogenetic stimulation and recording of neurons in vivo using cell-type-specific expression of Channelrhodopsin-2. Nature protocols. 5, 247-254 (2010).
- Huber, D. Sparse optical microstimulation in barrel cortex drives learned behaviour in freely moving mice. Nature. 451, 61-64 (2010).
- Arenkiel, B. R. In vivo light-induced activation of neural circuitry in transgenic mice expressing channelrhodopsin-2. Neuron. 54, 205-218 .
- Albeanu, D. F. LED arrays as cost effective and efficient light sources for widefield microscopy. PLoS ONE. 3, 2146-2146 (2008).
- Slotnick, B., Bodyak, N. Odor Discrimination and Odor Quality Perception in Rats with Disruption of Connections between the Olfactory Epithelium and Olfactory Bulbs. J. Neurosci. 22, 4205-4216 (2002).
- Gradinaru, V. Molecular and cellular approaches for diversifying and extending optogenetics. Cell. 141, 154-165 (2010).
- Valley, M., Wagner, S., Gallarda, B. W., Lledo, P. Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons. J. Vis. Exp. (57), e3379-e3379 (2011).
