Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller
Summary
ViBE karmaşık matrisler daha hassas, tekrarlanabilir, otomatik sonuçlar için platform üzerinde özel testlerinin geliştirilmesi açıklanmıştır. Evrensel kartuşu testleri özel testlerin kullanım için kolayca adapte edilmelidir sağlar. Bu çok yönlülük, roman deneyleri ya da bu video örneklediği mevcut manuel testleri otomatik sürümleri, hızlı geliştirme ve doğrulama sağlar.
Abstract
Özel testlerin benzersiz proteinler için genellikle zaman alıcı manuel algılama ve ELISA veya alternatif platformları üzerinde geliştirme karmaşıklığı nedeniyle Western blot gibi kantitatif teknikleri ile sınırlıdır. BioScale tescilli Akustik Membran mikropartikül (AMMP) teknolojisi daha iyi bir hassasiyet, tekrarlanabilirlik ve otomatik kullanım sağlayan, sandviç immunoassay kolay ViBE platform üzerinde kullanım için geliştirilmiş olmasını sağlar. Bir örnek olarak verilmiştir, bu protokol, özel bir Çin Hamsteri Yumurtalık-Host Hücre Proteini (CHO-OP) tahlil geliştirmek için prosedür özetlenmektedir. Burada özetlenen immun geniş bir yelpazede gelişmesi için genel ilkeler takip edilebilir.
Hesaplamak için sensör yüzeye mikro bağlama kaynaklanan salınım frekans değişiklikleri ölçerek bir AMMP tahlil önlemleri antijen konsantrasyonu. Bu dört ana bileşenden oluşur: (1) Fonksiyonlu sekiz sensör çipi içeren bir kartuş, (2) antikor etiketli manyetik mikro Fonksiyonlu yonganın yüzey antijeni içeren örnekler (4) bağlanır (3) hapten etiketli antikor ilgi. BioScale Kullanıcı biyosensör, sekiz ayrı akışkan yolları ile bireysel membranlar içeren bir rezonans bir cihazdır. Membranlar kütlesi yüzeyde biriken ve bu frekans değişikliği eklendi kütle miktarını ölçmek için kullanılır yanıt salınım frekansını değiştirmek.
Sensörü anti-hapten antikor ile işlevselleştirildiyse immunoassay geniş bir yelpazede kullanım kolaylaştırmak için. Testi spesifik antikorların tek bir antikor ve diğer biotin hapten etiketi kovalent konjugasyon ile modifiye edilmiştir. Biotin etiketi hapten etiketli antikor ile birlikte, bir sandviç analit yakalamak için kullanılan, çiftli manyetik boncuk streptavidin antikor bağlamak için kullanılır. Kompleks anti-hapten/hapten etkileşim yoluyla çip bağlanır. Her testin sonunda sensörleri 96-plaka sıralı sütun analizi sağlayan bir seyreltik asit ile temizlenir çalıştırın.
Burada, biyoproses geliştirme için özel bir CHO-OP AMMP testi geliştirmek için yöntemi mevcut. AMMP testlerin geliştirilmesi veya AMMP testleri mevcut testlerin değiştirerek karmaşık örnekleri ve azaltılmış operatörü saati (tekrarlanabilirlik, hassasiyet) daha iyi performans sağlayabilir. Protokol, kalkınma için adımlar gösterir ve tartışma bölümüne temsilcisi sonuçlarının gözden geçirilmesi. BioScale tahlil optimizasyon ve özelleştirme parametreleri hakkında daha ayrıntılı bir açıklama için başvurun. Bu kit Artık Protein A, Ürün titre ve CHO-OP gibi genel biyoproses geliştirme testleri sunuyor.
Protocol
Discussion
Yukarıdaki örnekler, karmaşık örneklerinde AMMP son derece duyarlı kantitatif sonuçlar göstermektedir. Bu performans, kolaylık ve kontrol sistemi içine reaktifler biçimlendirme ile teslim çeşitli uygulamalar için sağlıyor. Bu uygulamalar tümör Gadd34 gibi bir hedef için özel ya da konak hücre proteini tespit ve kantitatif arıtma akışı çapraz örneklerinde olduğu gibi hedeflerin bir spektrum için genel olabilir. Son derece esnek AMMP ile birlikte düşük yükü ViBE platformu kritik testleri sunmak için güçlü bir araç sağlar.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NHS-Chromogenic-biotin or NHS-Chromogenic Biotin Labeling kit | ||||
| If NHS-Chromogenic-biotin is purchased as a reagent the following additional materials will be required | ||||
| Water-miscible organic solvent such as dimethylsulfoxide (DMSO) or dimethylformamide (DMF) | ||||
| Phosphate buffered saline (PBS) or other amine free buffer (pH 7 – 9) | ||||
| Desalting columns or dialysis units for buffer exchange | ||||
| Spectrophotometer able to measure 354 and 280 nm – for measuring protein and biotin concentrations | ||||
| Biotinylated antibody (2-5 biotins/Ab) | ||||
| Streptavidin magnetic beads | BioScale | (10 mg/mL) ~108 beads/mg | ||
| Magnet for microcentrifuge tubes | New England BioLabs | cat # S1510S | ||
| Biotinylated BSA for blocking | ||||
| Phosphate buffered saline (PBS) | ||||
| PBS 0.1% Tween 20 | ||||
| Vortex | ||||
| Microcentrifuge holder for Vortex or tube rotator | ||||
| Antibody or protein to be labeled | ||||
| NHS-Fluorescein or NHS-Fluorescein Labeling kit | ||||
| If NHS-Fluorescein is purchased as a reagent the following additional materials will be required | ||||
| Water-miscible organic solvent such as dimethylsulfoxide (DMSO) or dimethylformamide (DMF) | ||||
| 50 mM borate, pH 8.5 or other amine free buffer (pH 7 – 9) | ||||
| Desalting columns or dialysis units for buffer exchange | ||||
| Measurement of protein and fluorescein concentrations requires a spectrophotometer able to measure 493 and 280 nm. | ||||
| Diluent | BioScale | to dilute beads and FlAb | ||
| Sample Diluent | BioScale | to dilute samples and calibrators | ||
| Running Buffer Additive | BioScale |
