Это видео демонстрирует протокол применения neurosphere тест для изоляции и расширения нервные стволовые клетки из ганглиозные возвышения эмбриональных день 14-мозга мыши.
В млекопитающих, стволовые клетки действует как источник недифференцированных клеток для поддержания генезисе клеток и восстановление в различных тканях и органах в течение жизни животного. Они могут потенциально заменить клетки, которые теряются в процессе старения или в процессе получения травмы и болезни. Существование нервные стволовые клетки (NSCs) впервые был описан Рейнольдса и Вайса (1992) у взрослых млекопитающих, центральной нервной системы (ЦНС), используя новые бессывороточной культуре системы, neurosphere анализа (NSA). С помощью этого теста, это также возможно, чтобы изолировать и расширить NSCs из разных регионов эмбриональных ЦНС. Это, в пробирке NSCs расширяемых мультипотентных и может привести к трем основным типам клеток центральной нервной системы. Хотя АНБ кажется относительно прост в исполнении, внимание к процедурам продемонстрировали здесь требуется для достижения надежных и устойчивых результатов. Это видео демонстрирует практически АНБ для создания и расширения NSCs из эмбриональных день 14-мышь мозговой ткани и содержит техническую информацию, таким образом можно достичь воспроизводимых культур neurosphere. Процедура включает в себя уборка E14 эмбрионов мышей, мозг микродиссекции собрать ганглиозные возвышения, диссоциация собрано ткани в среде НСК для получения суспензии отдельных клеток и, наконец, покрытие клеток в культуре АНБ. После 5-7 дней в культуре, в результате первичного нейросферы являются пассировали для дальнейшего расширения числа NSCs для будущих экспериментов.
Neurosphere анализ является методом выбора для изоляции и расширения нервные стволовые клетки 1-5 из-за своей простоты и воспроизводимости. Этот анализ является бесценным инструментом для крупномасштабных поколения недифференцированных предшественников нервной клетки, которые могу…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана финансирование из Оверстрит Foundation.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
NeuroCult NSC Basal Medium | Medium | Stem Cell Technologies | 05700 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05701 | |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
*MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
*HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
*Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
Fine curved forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11251‐35 | |
Small fine forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11272‐30 | |
Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050‐10 | |
Fine scissors | Surgical tools | World Percision Instruments, Inc. | 500216 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
*To make HEM, mix 1×10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.