Summary

מדידת משלים Haemolytic 50% (CH 50) פעילות של סרום

Published: March 29, 2010
doi:

Summary

מסלול קלאסי מופעל על ידי נוגדן ו לשיאו תמוגה תא היעד. CH<sub> 50</subAssay> מספק מדד הפעילות משלימים מדגם בסרום. סרט הווידאו הזה ממחיש את שלבים בקביעת CH<sub> 50</sub> מדגם בסרום, החישובים ופענוח התוצאות.

Abstract

מערכת המשלים היא קבוצה של חלבונים אשר מופעלים כאשר להוביל היעד תמוגה התא ומקל phagocytosis דרך opsonisation. רכיבים משלימים הפרט ניתן לכמת אך זה אינו מספק כל מידע על הפעילות של מסלול. CH<sub> 50</sub> הוא assay סינון עבור הפעלה של מסלול משלים קלאסי (איור 1) והוא רגיש לירידה, העדר ו / או חוסר פעילות של רכיב כלשהו של מסלול. CH<sub> 50</sub> בדיקות יכולת תפקודית של רכיבים משלימים בסרום של מסלול קלאסי lyse אדום דם תאים כבשים (SRBC) מראש מצופה נוגדן ארנבת אנטי כבשים אדום דם תאים (haemolysin). כאשר נוגדן מצופה SRBC מודגרת עם מבחן בסרום, המסלול הקלאסי של המשלים מופעל תוצאות haemolysis. אם רכיב משלים הוא נעדר, CH<sub> 50</subרמה> יהיה אפס, אם אחד או יותר מרכיבים של מסלול קלאסי הם ירדו, CH<sub> 50</sub> תהיה ירידה. נפח קבוע של SRBC רגיש בצורה אופטימלית מתווסף דילול כל בסרום. לאחר דגירה, התערובת centrifuged ומידת haemolysis היא לכמת ידי מדידת ספיגת המוגלובין מתפזרות supernatant ב 540nm. סכום פעילות משלימים נקבעת על ידי בחינת היכולת של דילולים שונים של בדיקה בסרום כדי lyse SRBC נוגדן מצופה. וידאו זה מתאר את הצעדים הכרוכים בניתוח ניסיוני רמת הפעילות משלימים של מסלול המשלים הקלאסית.

Protocol

הכנת תמיסת מלח 5x שנאגרו ורונל (VBS) כדי להכין את תמיסת מלח שנאגרו ורונל (VBS), שלושה פתרונות שונים צריכים להיות מוכנים. הכן פתרון 1 על ידי המסת 21.25gm של NaCl ו 0.94gm של Barbitone נתרן 350ml של מים מזוקקים. הריכו…

Discussion

Assay 50 CH כפוף הפרעות רבות. SRBC כמה הם שבירים יותר מאחרים, וכתוצאה מכך haemolysis ספונטנית כי הוא לא קשור כדי להשלים פעילות. הזיקה של הנוגדן ארנב משתנה הרבה הרבה מיצרן אחד למשנהו; זה משפיע על כמות נוגדן אשר נקשר SRBC. כמו כן, תהליך של רגישות SRBC עם תוצאות הנוגדנים בתאים עם כמו?…

Acknowledgements

המחבר מבקש להודות מיס לורה מתיוס לביצוע הטכניקה ומר פול שפרד עבור הצילום. פרויקט זה מומן על ידי אוניברסיטת דרום אוסטרליה, תוכנית המעבדה לרפואה.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Sheep red blood cells   CSL 2490201 Use at 1% final
Serum       Human serum
Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated   AdB Serotec C12HSB  
96 well flat bottom plate   Sarstedt 83.1839  
Veronal buffered saline       Use at 1x final
Waterbath        
Plate reader        
37°C room/incubator        

Referencias

  1. Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. . Immunology. , (2003).

Play Video

Citar este artículo
Costabile, M. Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum. J. Vis. Exp. (37), e1923, doi:10.3791/1923 (2010).

View Video