هذا الفيديو يوضح كيفية قياس غزو الخلية من خلال إدراج ثقافة الخلية باستخدام منهجية مضان مقرا لها.
السمة المميزة للخلايا النقيلي هو قدرتها على غزو عن طريق الغشاء القاعدي وتهاجر إلى أجزاء أخرى من الجسم. يجب أن تكون قادرة على الخلايا كلا البروتياز التي تفرز كسر الغشاء القاعدي وكذلك الهجرة من أجل أن تكون الغازية. دينار بحريني غزو الورم BioCoat يوفر نظام الخلايا مع الظروف التي تسمح بتقييم ممتلكاتها الغازية<em> في المختبر</em<sup> 1،2</sup>. وهو يتألف من FluoroBlok فالكون 24 دينار بحريني Multiwell بلايت مع إدراج 8.0 ميكرون مسام الغشاء PET الحجم الذي كانت مغلفة بشكل موحد مع BD Matrigel ماتريكس. هذه الطبقة موحدة دينار بحريني Matrigel ماتريكس بمثابة إعادة الغشاء القاعدي<em> في المختبر</em> توفير الحاجز الحقيقي لخلايا غير الغازية في حين تقديم بنية البروتين مناسبة لدراسة الغزو. عملية طلاء occludes مسام الغشاء ، ومنع غير الغازية الخلايا السرطانية من الهجرة من خلال الغشاء. في المقابل ، الخلايا الغازية هي قادرة على فصل أنفسهم عن والهجرة من خلال غشاء المغلفة. ويمكن تحقيق الكميات لغزو الخلايا التي إما الوسم قبل الغزو أو ما بعد الخلية مع صبغة الفلورسنت مثل DiIC<sub> 12</sub> (3) أو calcein صباحا ، على التوالي ، وقياس مضان من الخلايا الغازية. منذ الغشاء FluoroBlok كتل دينار بحريني فعال مرور الضوء 490-700 نانومتر في الكفاءة> 99 ٪ ، fluorescently المسمى لم يتم الكشف عن الخلايا التي لم غزتها القارئ قراءة لوحة أسفل مضان. ومع ذلك ، لم تعد محمية الخلايا التي قد غزت على الجانب السفلي للغشاء من مصدر الضوء ، ويتم الكشف عنها مع قارئ لوحة منها. هذا الفيديو يوضح غزو الخلايا مقايسة نقطة النهاية ، وذلك باستخدام calcein للكشف عن خلايا AM غزا.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |