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Purificación de proteínas anaerobias y análisis cinético mediante electrodo de oxígeno para el estudio de la inhibición y la actividad de DesB dioxigenasa
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Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition
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Purificación de proteínas anaerobias y análisis cinético mediante electrodo de oxígeno para el estudio de la inhibición y la actividad de DesB dioxigenasa

DOI:
10.3791/58307-v

•

08:31 min

•

October 03, 2018

•

, , , ,
1Department of Chemistry,Wesleyan University

Kapitel

  • 00:04Titel
  • 00:33Anaerobic DesB Purification
  • 02:29Anaerobic Protein Concentration, Buffer Exchange, and DesB Desalting
  • 04:10Oxygen Electrode Preparation
  • 05:41Oxygen Electrode Kinetic Assay
  • 06:48Results: Representative DesB Dioxygenase Induction, Activity, and Inhibition
  • 07:50Conclusion

Summary

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Aquí presentamos un protocolo de purificación de proteínas anaerobias, anaerobias proteína concentración y posterior caracterización cinética mediante un sistema de electrodo de oxígeno. El método se ilustra utilizando la enzima DesB, una enzima dioxigenasa que es más estable y activo cuando purificada y almacenada en un medio ambiente anaeróbico.

Tags

AnaerobicProtein PurificationKinetic AnalysisOxygen ElectrodeDesB DioxygenaseEnzyme ActivityInhibitionInorganic BiochemistryOxygen-sensitive MetalsProtein ExpressionCell PelletAmylose ColumnLysozymeHigh-pressure HomogenizationNitrogen GasGlove BoxAmylose Column BufferElution BufferFerrous Ammonium SulfateDithiothreitol

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